[发明专利]一种检测面粉中过氧化钙的酶-比色法

说明书

技术领域

本发明涉及食品安全检测中过氧化钙的检测，尤其是涉及酶-比色法检测面粉中掺加的过氧化钙。

背景技术

过氧化钙是一种常见的化工原料，淡黄色结晶粉末，分子量72.08，广泛用于食品、化工、纺织等行业。在食品行业，常用来改善小麦粉的后熟、面粉增白、麦粉增筋剂、面粉脱色剂、面包改良剂、食用油漂白等领域。为了增加小麦粉的筋道和口感，面粉行业普遍加入过氧化苯甲酰、过氧化钙作为小麦粉增筋剂、增白剂。我国自2011年5月1日起，禁止在面粉生产中添加过氧化苯甲酰、过氧化钙[卫生部等七部(局)发布《关于撤销食品添加剂过氧化苯甲酰、过氧化钙的公告》(2011年第4号)]。欧盟已经禁止过氧化苯甲酰、过氧化钙的添加，美国、加拿大、日本等地还允许添加，如美国过氧化钙最大允许添加量为45mg/kg。面团改良剂也经常含有过氧化钙。

将过氧化钙添加到面粉中，长期食用可能会致癌，对人体健康会产生很大的危害。而有些面粉生产厂家为了面粉脱色、加快面粉的熟化，可能违规滥加过氧化苯甲酰或过氧化钙。现有的国家标准、行业标准和公开文献中，未发现有测定面粉中过氧化钙的方法。因此，十分需要建立一个准确可行的面粉中过氧化钙的检测方法。

一般过氧化钙主含量的测定有高锰酸钾滴定法，然而，由于面粉基质干扰大，该方法不能直接用于面粉中过氧化钙的测定。辣根过氧化物酶(Horseradish Peroxidase，HRP)可以催化过氧化氢参与的多种还原剂的氧化反应，常用的HRP底物有无色的苯胺类和苯酚类衍生物，通过过氧化物酶催化过氧化氢氧化这些底物，生成有颜色的醌式或偶氮类物质，可以用光度法、荧光法测定。辣根过氧化物酶与其它酶的耦合常用于食品中某些成分的分析，如糊精、淀粉、蔗糖、葡萄糖等，但未发现HRP应用于过氧化物检测的报道。

本发明建立了一种检测面粉中过氧化钙的酶-比色法，该方法快速、准确、有效，有利于政府质检部门对面粉行业产品的监管，以及检测机构对面粉的检测。

发明内容

本发明的目的是提供一种测定面粉中过氧化钙的方法。为此，本发明采用下述技术方案：

(1)称取0.5-2.5g样品于50mL离心管中，加入10-20mL有机溶剂提取，目的是除去其他过氧化物的干扰(如过氧化苯甲酰)，涡旋混匀，8000rpm-12000rpm离心5min，弃去上清液。

(2)剩余样品经5-20mL0.2-1％稀酸转移至50mL比色管中，进行酸化，涡旋混匀，室温下振荡反应10-20min。

(3)然后加入稀碱溶液调节溶液pH值到6.5-8.0，定容。

(4)将上述溶液转移至50mL离心管中，10000rpm高速离心分离5min，得上清液；

(5)取10-20mL上清液加入过氧化物酶试剂溶液1-3mL，30-40℃恒温水浴显色10-20min，冷却至室温，定容至25-50mL。

(6)在波长505nm处测定吸光度。

步骤(1)中所用的有机溶剂，为丙酮。

步骤(2)中所用的稀酸，为稀盐酸或稀硫酸，优选稀硫酸。

步骤(2)中所用的稀酸的质量浓度为0.2-1％；所用的烯酸的体积为5-20mL。

步骤(3)中所用的稀碱溶液，为20％和0.1％稀氢氧化钠或氢氧化钾溶液，优选稀氢氧化钠。

步骤(5)所用的过氧化物酶为所用的过氧化酶为辣根过氧化物酶

过氧化物酶试剂溶液由辣根过氧化物酶、4-氨基安替比林和苯酚的磷酸盐缓冲液组成。4-氨基安替比林0.00154mol/L的0.2mol/L的磷酸盐缓冲液(pH＝7.6)，0.022mol/L苯酚溶液，两者的体积比1∶1组成混合溶液。将辣根过氧化物酶加入到混合溶液中，轻轻混匀，酶活力10U/mL，4℃下可以保存1个月。

样品溶液若不变色，则没有掺加过氧化钙，属于合格的面粉；溶液若有颜色变化，则为掺加有过氧化钙。过氧化苯甲酰也是面粉加工常用的增白剂，属于强氧化剂，遇酸会分解为苯甲酸和过氧化氢。为了避免过氧化苯甲酰的干扰，本方法利用过氧化苯甲酰易溶于丙酮的特点，先利用有机溶剂提取以除去过氧化苯甲酰，然后再检测过氧化钙。

具体实施方式

下面对本发明做进一步详细说明。

实施例1：

标准曲线配制