[发明专利]电泳用凝胶及其用途和制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及生物技术领域，具体的，本发明涉及电泳用凝胶及其用途和制备方法，更具体的，本发明涉及一种分离胶、一种用于制备分离胶的方法、一种用于制备分离胶的组合物、一种用于电泳的凝胶、一种制备用于电泳的凝胶的方法和一种生物样品分析方法。

背景技术

聚丙烯酰胺凝胶是由丙烯酰胺（Acrylamide）单体和少量交联剂甲叉双丙烯酰胺（Bis-acrylamide）通过化学催化剂过硫酸铵（Ammonium persulfate），四甲基乙二胺（TEMED）作为催化剂通过聚合作用形成三维空间的高聚物。聚合后的聚丙烯酰胺凝胶形成网状结构。具有浓缩效应、电荷效应、分子筛效应，因此而被广泛的应用于遗传学，分子生物学，细胞生物学，微生物学，植物学，动物学，以及医学等各个学科领域中蛋白质分子量测定及分离。

然而，目前的聚丙烯酰胺凝胶仍有待改进。

发明内容

本发明旨在至少在一定程度上解决上述技术问题之一或至少提供一种有用的商业选择。

本发明是基于发明人的下列发现而完成的：在生物技术领域，通常根据所期望分离的蛋白质的情况，需要通过改变丙烯酰胺单体溶液浓度或增减交联剂甲叉双丙烯酰胺双体比例的办法制成孔度大小不同的凝胶（参见图1）。通常针对不同分子量大小蛋白质，尤其是分子量差异比较大的蛋白质，需要选择适当浓度的胶百分比浓度。正如图1所示,8％凝胶仅能获得5个分离范围(200KD、116KD、97KD、66KD和45KD)，10％凝胶能获得6个分离（200KD、116KD、97KD、66KD、45KD和31KD）12％凝胶能获得8个分离（200KD、116KD、97KD、66KD、45KD、31KD、21.5KD和14.4KD），虽然15％凝胶可获得9个分离范围，即可以看到所有蛋白质分子标记（marker）条带，但是该浓度的凝胶对于大分子量的蛋白得不到很好的分离效果，尤其是对小分子量的蛋白质，条带往往表现Smeared的缺点，因此不适合用于分离分子量大的蛋白质以及小分子量的蛋白。因此在实验中，如果需要同时分离小分子量和大分子量的蛋白质样品，则需要使用4－15％和4－20％线性梯度凝胶来分离。虽然这种梯度凝胶可以获得9个分离（200KD、116KD、97KD、66KD、45KD、31KD、21.5KD、14.4KD和6.4KD），但它们的配置过程非常繁琐复杂，需要通过特殊的梯度混合器来配置，耗时且不易在普通实验室推广应用。发明人通过对凝胶配方尤其是分离胶的配方进行了深入的研究，得到了新型的凝胶配方，则可以使用单一浓度的电泳凝胶就能够实现同时对多种分子量的蛋白质样品的良好分离效果，并且可以获得和4－15％和4－20％线性梯度凝胶相媲美的分离效果。

在本发明的第一方面，本发明提出了一种分离胶。根据本发明的实施例，该分离胶是通过下列步骤制备的：将水、第一缓冲液、第一自由基聚合性单体溶液、第一氧化还原聚合引发剂和10重量%APS混合；以及使所得到的混合物固化成型，以便获得所述分离胶，其中，所述第一缓冲液的pH为8.8，所述第一自由基聚合性单体溶液的浓度为40重量%，所述水、第一缓冲液、第一自由基聚合性单体溶液、第一氧化还原聚合引发剂和10重量%APS的体积比为：4.3ml：2.5ml：3.5ml：20μl：75μl。发明人惊奇地发现，通过利用该分离胶，在对生物样品进行分离时，能够有效地对大范围分子量的生物样品例如蛋白质，进行有效地分离，例如根据本发明的实施例，利用根据本发明实施例的分离胶，可以有效地分离从6KD至200KD的蛋白质。