[发明专利]分枝杆菌属检测试剂盒及其使用方法

说明书

技术领域

本发明涉及生物检测试剂，具体涉及一种分枝杆菌属检测试剂盒及其使用方法。

背景技术

分枝杆菌属（Mycobacterium）是一类细长略带弯曲的杆菌，有分枝生长的趋势，因而得名。本菌属种类较多，可分为结核分枝杆菌复合群、非结核分枝杆菌和麻风分枝杆菌三类。

结核分枝杆菌（M.tuberculosis），俗称结核杆菌或结核菌，是引起结核病的病原菌。结核病是威胁人类及动物健康的重大传染病。世界卫生组织(WHO)专门发布了全球结核控制战略，并把每年的3月24号定为世界防治结核病日。

与结核分枝杆菌复合群对应的是各种非结核分枝杆菌，目前已发现上百种，广泛存在于土壤、环境、动物中。2000年第四次全国结核病流行病学抽样调查报告显示，我国现有活动性肺结核患者451万，菌阳肺结核患者196万。分枝杆菌培养阳性者中，结核分枝杆菌占86.4%，牛结核分枝杆菌占2.5%，非结核分枝杆菌占11.1%。而1990年第三次全国结核病流调时非结核分枝杆菌仅占4.9%，由此可见，非结核分枝杆菌的比率较前明显增加。非结核分枝杆菌患者对大多数一线抗结核药物耐药，采用目前标准的化疗方案治疗无效。传统的分枝杆菌菌种鉴定和药敏实验方法建立在培养基础上，烦琐、费时，需1～2月时间，不能满足临床开展早期有效化疗的需要，使非结核分枝杆菌患者经长期规则化疗而疗效不佳，疗程延长，成为难治、复治患者，细菌可能在局部播散。因此，分枝杆菌属的快速鉴定对结核病及非结核分枝杆菌病的早期诊断、鉴别诊断、有效化疗和控制传播都有极其重要的意义。

传统分枝杆菌检测方法，由于其检测周期长、程序复杂、所需试剂繁多等缺点已远远不能满足现代检测要求。以聚合酶链式反应（PCR）技术为代表的病原核酸检测技术在实际应用中存在一些问题，如普通聚合酶链式反应（PCR）技术需要专门的仪器，而且存在容易交叉污染和操作过程烦琐的缺点。而荧光实时定量聚合酶链式反应（real time PCR）技术虽然较好地解决了交叉污染的问题，并简化了操作过程，但却需要更复杂的定量测定仪器，因此不适用于现场快速检测。而且实时定量聚合酶链式反应PCR技术中荧光探针的成本较高，加大了推广应用的难度。免疫学检测技术快速简便成本低廉，但要求高质量高稳定性的单克隆抗体，否则因准确性不够，目前只能是辅助检测手段。所以及时运用生物技术发展的最新成果对满足病原微生物检测要求的不断提高具有重要意义。其中恒温扩增（Isothermal Amplification）核酸快速检测技术是病原核酸检测技术上的长足进步，现已建立起来的环介导恒温扩增技术（LAMP）具有很多的优越性。

因此，需要一种检测效果更全面、特异性高、漏检率低的分枝杆菌属检测试剂盒及其使用方法以解决上述问题。

发明内容

本发明的目的在于解决现有技术的不足之处而提供一种检测效果更全面、特异性高、漏检率低的分枝杆菌属检测试剂盒。

本发明的目的可以通过以下技术措施实现：一种分枝杆菌属检测试剂盒，所述的分枝杆菌属检测试剂盒包括以分枝杆菌属的hsp65基因为靶基因、基于环介导恒温扩增技术设计的两对引物：内引物FIP/BIP和外引物F3/B3，所述的两对引物为

外引物F3：（SEQ ID NO 1）

TCATCACCGTCGAGGAGTC

外引物B3：（SEQ ID NO 2）

CGGCTCCGATGACCTTCTC

内引物FIP：（SEQ ID NO 3）

GTCGGTCACGAAGTACCCCGAGCTGCAGCTCGAGCTCACC

内引物BIP：（SEQ ID NO 4）

AGCGTCAGGAGGCVGTCCTTGACAGTGGACACCTTGGAG；

或

外引物F3’：（SEQ ID NO 5）

AGTCCATCGGTGACCTGATC

外引物B3’：（SEQ ID NO 6）

AGGACCGCCTCCTGAC

内引物FIP’：（SEQ ID NO 7）

GGTGTTGGACTCCTCGACGGGCCGAGGCGATGGACAA

内引物BIP’：（SEQ ID NO 8）

GCAGCTCGAGCTCACCGAGCGGGTCGGTCACGAAGT；

或

外引物F3”：（SEQ ID NO 1）

TCATCACCGTCGAGGAGTC