[发明专利]一种刺番荔枝素C的制备方法

说明书

技术领域

本发明属于中药提取分离技术领域，涉及一种从刺果番荔枝叶中分离制备刺番荔枝素C的方法。

背景技术

刺番荔枝素C，白色无定形粉末，来源于番荔枝科植物刺果番荔枝Annona muricata L.的叶。刺果番荔枝俗称红毛榴连，一种热带水果，属番荔枝科番荔枝属。虽然名称里有榴连二字，但不具臭味，分类上与台湾地区所产的释迦相近。果肉呈乳白色，酸甜多汁，种子黑色，散在果肉纹理中。原产于西印度群岛，现广泛引种于世界各地。中国大陆产区为海南、云南、广西等气温较高地区。

刺果番荔枝果可食用；树皮纤维可造纸；根可止泻；种子含油达20%。刺果番荔枝叶主要有效成分为乙酰精宁类化合物，以刺番荔枝素C为主。刺番荔枝素C具有细胞毒活性，对A-549、MCF-7和HT-29三种人型癌细胞株呈显著的细胞毒活性，ED₅₀(μg/ml)相应为0.308、0.228和1.54。目前，番荔枝科植物次生代谢物番荔枝乙酰精宁类化合物被视为新的抗肿瘤药物的潜在资源，是抗肿瘤药物的候选药物。

目前，尚未见高含量刺番荔枝素C的制备方法相关专利报道。

发明内容

本发明的目的是提供一种刺番荔枝素C的制备方法。

本发明的目的是通过以下技术方案实现的：

（1）取刺果番荔枝叶，经粉碎处理，置于闪式提取器中，加5-12倍60-80%乙醇溶液，进行闪式提取，过滤得到提取液；

（2）提取液通过截留分子量为1000-3000的超滤膜超滤和截留分子量为300-500的纳滤膜浓缩，操作压力为0.5-2.5MPa，膜浓缩液减压浓缩干燥，得粗提物；

（3）采用高速逆流色谱法分离纯化粗提物中的刺番荔枝素C，其两相溶剂系统为石油醚-乙酸乙酯-甲醇-水，上相注满高速逆流色谱柱为固定相，转动主机，泵入下相做流动相，流动相溶解粗提物由进样阀进样，紫外检测器在线监测，收集刺番荔枝素C组分；

（4）将刺番荔枝素C组分进行真空浓缩，析出结晶，过滤、洗涤干燥即得刺番荔枝素C。

所述步骤（1）中闪式提取电压为140-150V，提取时间为60s-90s。

所述步骤（3）中石油醚-乙酸乙酯-甲醇-水溶剂系统的体积比为5-8:3-5:4-6:2-3。

本方法积极效果是：

（1）本方法采用闪式提取法，快速高效、低耗能、环保；

（2）本方法采用膜分离技术，能有效去除多种杂质，且不会破坏有效成分的生物活性；

（3）本方法采用高速逆流色谱法，收率高、制备量大、制备周期短，解决了柱层析效率低而且污染严重的技术缺陷；

（4）本方法工艺步骤操作较简单，易操作，所得产品纯度高。

下面将结合具体实施方式进一步说明本发明，但本发明要求保护的范围并不局限于下列实施方式。

具体实施方式：

实施例1：

取刺果番荔枝叶，经粉碎处理，称取1kg，加5倍80%乙醇溶液，提取电压为140V，提取时间为90s，进行闪式提取，过滤得到提取液，提取液通过截留分子量为3000的超滤膜超滤和截留分子量为500的纳滤膜浓缩，操作压力为0.8MPa，膜浓缩液减压浓缩干燥，得粗提物；采用高速逆流色谱法分离纯化粗提物中的刺番荔枝素C，以体积比5:4:6:2石油醚-乙酸乙酯-甲醇-水为两相溶剂系统，上相注满高速逆流色谱柱为固定相，转动主机，泵入下相做流动相，流动相溶解粗提物由进样阀进样，紫外检测器在线监测，收集刺番荔枝素C组分，进行真空浓缩，析出结晶，滤出结晶，过滤、洗涤干燥即得刺番荔枝素C，含量96.3%。

实施例2：

取刺果番荔枝叶，经粉碎处理，称取1kg，加12倍60%乙醇溶液，提取电压为140V，提取时间为80s，进行闪式提取，过滤得到提取液，提取液通过截留分子量为1000的超滤膜超滤和截留分子量为500的纳滤膜浓缩，操作压力为1.8MPa，膜浓缩液减压浓缩干燥，得粗提物；采用高速逆流色谱法分离纯化粗提物中的刺番荔枝素C，以体积比7:3:4:3石油醚-乙酸乙酯-甲醇-水为两相溶剂系统，上相注满高速逆流色谱柱为固定相，转动主机，泵入下相做流动相，流动相溶解粗提物由进样阀进样，紫外检测器在线监测，收集刺番荔枝素C组分，进行真空浓缩，析出结晶，过滤、洗涤干燥即得刺番荔枝素C，含量97.2%。

实施例3：