[发明专利]一种从鹿衔草中分离水晶兰苷单体的方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种从植物中分离水晶兰苷单体的方法，尤其涉及一种从鹿衔草中分离水晶兰苷单体的方法，属于水晶兰苷单体的制备领域。

背景技术

鹿衔草为《中国药典》一部收载的中药品种，是鹿蹄草科植物鹿蹄草（Pyrola callianthaH·Andres）或普通鹿蹄草（P·decorateH·Andres）的干燥全草，具有祛风湿、强筋骨、止血等功效。现代药理学研究表明，鹿衔草对心血管系统有一定的作用，并具有抗菌、抗炎、镇痛等活性。其化学成分中以水晶兰苷为主要成分的环烯醚萜苷类是生物活性的基础成分。

水晶兰苷（monotropein）具有较强的抗炎、镇痛作用，分子式为：C16H22O11；分子量为：390.34，结构式如下：

现有水晶兰苷单体的纯化技术中，多采用反复硅胶柱层析等传统方法，其生产周期长，且存在水晶兰苷与其它杂质不易分离的情况，使得产品纯化困难、纯度不高，其质量和数量难以满足需要。

专利申请号为20101015031.5的中国发明专利申请公开了一种从巴戟天中提取水晶兰苷的方法，以巴戟天为原料，先乙醇超声提取，然后用聚酰胺树脂分离，最后通过重结晶得到水晶兰苷的产品。这种方法工艺看似简单，但收率较低，而且产品的纯度也不高，得不到单体成分，纯度难以达到98%以上。

专利号为ZL 200910311303.4的中国发明专利也公开了一种从巴戟天中提取水晶兰苷的方法，先进行乙醇热提取，然后通过乙酸乙酯萃取、正丁醇萃取、过滤进一步除杂、通过制备型高效液相色谱分离水晶兰苷单体、大孔树脂富集、干燥制得水晶兰苷单体产品。这种技术缺点在于：一般重结晶工艺目标成分损失量较大，萃取不完全造成产品损失，而且萃取工艺步骤繁琐，要重复操作，且试剂消耗量较大，另外，制备高效液相纯化产品对原料要求高，原料为澄清溶液，颜色不能太深，否则对柱子填料损害厉害，且难以分离极性等性质极相近的成分，所以制备型高效液相不适合分离巴戟天中的水晶兰苷；水晶兰苷不是巴戟天药材的主成分，在巴戟天药材中含量低，且存在与水晶兰苷性质相近的杂质，难以除去，所以选巴戟天为原料生产水晶兰苷，难以得到水晶兰苷的单体成分，即使能得到收率也很低，所以该技术很难实用于生产。

发明内容

本发明的目的就在于为了解决上述问题而提供一种从鹿衔草中分离水晶兰苷单体的方法，该方法能分离出高纯度的水晶兰苷单体。

为了达到上述目的，本发明采用了以下技术方案：

本发明所述从鹿衔草中分离水晶兰苷单体的方法，包括以下步骤：

（1）备料：将干燥后的鹿衔草粉碎为2～5mm的段；

（2）回流提取：用极性溶剂对粉碎的鹿衔草进行回流提取，鹿衔草质量与极性溶剂体积的比例为1:（10～30），单位分别是千克和升，提取温度为40℃～80℃，提取时间为5～10h；

（3）富集：取步骤（2）获得的浓缩液，上AB-8大孔树脂进行一次吸附，吸附完全后依次用水、浓度为20～40%的乙醇溶液、浓度为80～95%的乙醇溶液解析，收集浓度为20～40%的乙醇解析液，浓缩至无醇，然后再次吸附，吸附完全后用浓度为70～90%的乙醇溶液解析，收集解析液，于40～60℃浓缩至浸膏，然后用60-80目硅胶拌样，干燥成分散的颗粒状原料，备用；

（4）分离：将200-300目硅胶置于体积比为25:1～15:1的乙酸乙酯-甲醇溶液中湿法装柱，分离柱直径为10～30cm，用体积比为25:1～15:1的乙酸乙酯-甲醇溶液平衡分离柱，平衡好后，按质量比为原料:硅胶=1:（2～4）的比例上步骤（3）得到的颗粒状原料，然后用体积比为20:1～5:1的乙酸乙酯-甲醇溶液梯度洗脱，乙酸乙酯-甲醇溶液中加入三聚磷酸钠固体，乙酸乙酯-甲醇溶液体积与三聚磷酸钠固体质量的比例为1:（0.5～2），单位分别是升和克，收集洗脱液为目标产品溶液，即得到水晶兰苷的粗溶液，于40℃～60℃减压回收试剂，得到水晶兰苷粗品；

（5）脱盐干燥：将步骤（4）所得的水晶兰苷粗品用水溶解，上活化好的MCI填料分离柱，先用水洗脱，水洗液丢弃，然后用浓度为60～80%的乙醇溶液洗脱，收集洗脱液，于40～60℃减压浓缩至干，然后真空常压干燥或冷冻干燥，得到水晶兰苷单体。MCI填料为一种聚苯乙烯基的反相树脂填料。