[发明专利]一种奇曼碱A的制备方法

说明书

技术领域

本发明属于天然植物提取领域，具体涉及一种奇曼碱A的制备方法。

背景技术

奇曼碱A（Chimanine A），分子式C₁₃H₁₅NO，分子量201.27。奇曼碱A是从芸香科(Rutaceae) 长叶图腊树Galipea longiflora Krause树皮、根、茎、皮和叶中提取分离的一种喹啉生物碱类化合物。实验研究表明，奇曼碱A具有抗寄生虫作用。体外抗5株利什曼原虫的IC₉₀为100μg/ml，抗5株克氏锥虫的IC₉₀为100μg/ml。体内对感染利什曼虫L.amazonensis PH8的小鼠也有效。

目前，国内尚未见奇曼碱A的提取纯化方法方面的报道。

发明内容

本发明的目的在于提供一种奇曼碱A的制备方法，该方法操作简单、得率高、安全环保，可快速大量分离高纯度奇曼碱A。

为实现上述目的，本发明采用的技术方案如下：

（1）提取：取长叶图腊树叶粉碎成粗粉，用5-10倍量70-95%的乙醇溶液，25-55℃下进行连续逆流超声提取20-100min，得到乙醇提取液；

（2）氧化铝柱层析：上述提取液浓缩至浸膏，加氧化铝拌匀、干燥后装柱，用氯仿-丙酮混合溶液洗脱，薄层检测，收集奇曼碱A流分，浓缩；

（3）制备型液相色谱分离：上述浓缩液采用制备型液相色谱分离，紫外检测器在线监测，收集奇曼碱A组分，将洗脱液旋转蒸发浓缩，得奇曼碱A粗晶；

（4）重结晶：将奇曼碱A粗晶用氯仿-丙酮重结晶，冷冻干燥得到高纯度奇曼碱A晶体。

步骤（1）所述超声频率为50-80KHz。

步骤（2）所述氧化铝为80-120目，氯仿-丙酮体积比为1:1，用量为柱体积的4-7倍。

步骤（3）所述制备型液相色谱的流动相为乙腈-0.15%乙二胺水溶液，体积比为32：68，紫外检测波长为228nm。

步骤（4）所述氯仿-丙酮的体积比为2-3:1。

本发明的优点在于：1）操作简单、耗时短，易于产业化放大；2）提取、柱层析、制备液相分离等步骤中的溶剂用量少，并可回收再利用；3）具有较高的经济效益和学术价值，本发明所得产品纯度高，可为奇曼碱A的进一步开发提供药理原料和实践支持。

具体实施方式：

下面结合具体实施例对本发明进一步说明：

实施例1：

取长叶图腊树叶1kg，粉碎成粗粉，从连续逆流超声提取设备头部进料口进料，从连续逆流超声提取设备尾部溶剂加入口加入10倍95%乙醇溶液，55℃下进行连续逆流超声提取20min，超声频率为80KHz，得到提取液，提取液减压回收试剂得浸膏，向浸膏中加氧化铝（120目）拌匀、干燥后装柱，用7倍柱体积的氯仿-丙酮（1:1）混合溶液洗脱，薄层检测，收集奇曼碱A流分，浓缩得浓缩液。将浓缩液加入甲醇至刚好溶解，溶解后的溶液经0.45μm微滤膜过滤，得到样品溶液取滤液进样，以乙腈-0.15%乙二胺水溶液为流动相，体积比为32：68，色谱柱以C8键合相为填料，粒径为10μm，柱长为15cm、直径为4cm，六通阀进样，进样体积为25ml，控制流速为50ml/min，紫外在线检测，检测波长为228nm，收集目标成分，减压回收试剂得奇曼碱A粗晶，用氯仿-丙酮（2.5:1）重结晶，冷冻干燥得到高纯度奇曼碱A晶体，经HPLC检测，纯度96.5%。

实施例2：

取长叶图腊树叶1kg，粉碎成粗粉，从连续逆流超声提取设备头部进料口进料，从连续逆流超声提取设备尾部溶剂加入口加入10倍80%乙醇溶液，45℃下进行连续逆流超声提取100min，超声频率为60KHz，得到提取液，提取液减压回收试剂得浸膏，加氧化铝（80目）拌匀、干燥后装柱，用4倍柱体积的氯仿-丙酮（1:1）混合溶液洗脱，薄层检测，收集奇曼碱A流分，浓缩得浓缩液。将浓缩液加入甲醇至刚好溶解，溶解后的溶液经0.45μm微滤膜过滤，得到样品溶液取滤液进样，以乙腈-0.15%乙二胺水溶液为流动相，体积比为32：68，色谱柱以C8键合相为填料，粒径为10μm，柱长为10cm、直径为1cm，六通阀进样，进样体积为5ml，控制流速为10ml/min，紫外在线检测，检测波长为228nm，收集目标成分，减压回收试剂得奇曼碱A粗晶，用氯仿-丙酮（3:1）重结晶，冷冻干燥得到高纯度奇曼碱A晶体，经HPLC检测，纯度97.8%。

实施例3：