[发明专利]一种提取纯化吉利柘树素A的方法

说明书

技术领域

本发明属于天然药物领域，具体而言，本发明涉及一种提取纯化吉利柘树素A的方法。

背景技术

吉利柘树素A（Gericudranin A），是一种黄酮醇类化合物，分子式：C₂₉H₂₄O₉，分子量：516.5，黄色粉末，mp135℃。主要存在于桑科(Moraceae)柘树Cudrania tricuspidata Bureau的茎皮中。

现代药理研究表明，吉利柘树素A具有细胞毒活性。对人型肿瘤细胞的ED₅₀(μg/ml)为皮肤癌CRL1579为3.65，皮肤癌L0X-IMVI为11.99，白血病MOLT-4F为2.65，结肠癌KM12为13.70，肾癌UO-31为6.99。

经文献检索，尚无适用于高纯度吉利柘树素A的提取纯化方法报道。

发明内容

本发明要解决的技术问题是提供一种适用于规模化生产、产品纯度高的提取纯化吉利柘树素A的方法。

为解决上述技术问题，本发明采用的技术方案如下：

（1）以柘树茎皮为原料，进行干燥、粉碎，采用超临界二氧化碳技术萃取柘树茎皮中的油脂类物质；

（2）残渣加6-10倍（V/W）70-90%丙酮溶液进行超声循环提取1-3次，每次1-2h，合并提取液；

（3）提取液浓缩后上聚酰胺树脂柱，先用水和35%乙醇溶液洗脱，再用75%乙醇溶液洗脱，收集75%乙醇洗脱液；

（4）洗脱液浓缩，上硅胶短粗柱，柱径高比为1:3-5，以乙酸乙酯-丙酮混合溶液为洗脱剂，收集洗脱液，浓缩，放置结晶；

（5）分出结晶，丙酮-正己烷混合溶剂重结晶，滤出结晶，冷冻干燥即得吉利柘树素A。

所述步骤（1）中超临界二氧化碳萃取温度为35-50℃，压力为20-32MPa，萃取时间为0.5-1h。

所述步骤（4）中乙酸乙酯-丙酮混合溶液体积比为1:5-15。

所述步骤（5）中丙酮-正己烷混合溶剂体积比为1-1.5:1。

综上所述，本发明存在以下优点：

（1）采用超临界二氧化碳萃取技术脱除油脂类物质，快速、高效；

（2）采用超声循环提取的方法，提取效率高；

（3）采用大孔树脂和硅胶短粗柱层析后进行结晶，从而获得含量98%以上的吉利柘树素A，成本低，分离效果好；

（4）本发明所用试剂乙酸乙酯、丙酮等，可替代通常柱层析采用的氯仿、甲醇，降低毒性和污染。

下面将结合具体实施方式对本发明做进一步阐述，但本发明要求保护的范围并不局限于下列实施例。

具体实施方式：

实施例1：

取柘树茎皮粗粉500g，采用超临界二氧化碳技术萃取柘树茎皮中的油脂类物质，萃取温度为35℃，压力为20MPa，萃取时间为1h，残渣加10倍（V/W）90%丙酮溶液进行超声循环提取1次，每次1h，合并提取液，浓缩后上聚酰胺树脂柱，先用水和35%乙醇溶液洗脱，再用75%乙醇溶液洗脱，收集75%乙醇洗脱液，浓缩，与100-200目的硅胶按重量比1:1拌匀、阴干，上硅胶短粗柱，柱径高比为1:5，以乙酸乙酯-丙酮混合溶液为洗脱剂，依次按1:5、1:10、1:15体积比进行洗脱，收集含吉利柘树素A的洗脱液，回收试剂，将所得吉利柘树素A浓缩液置于结晶罐中静置20小时使其结晶，过滤，分出结晶，采用丙酮-正己烷（1.5:1）混合溶剂重结晶，滤出结晶，冷冻干燥即得吉利柘树素A1.1g，纯度为98.4%。

实施例2：

取柘树茎皮粗粉500g，采用超临界二氧化碳技术萃取柘树茎皮中的油脂类物质，萃取温度为40℃，压力为25MPa，萃取时间为0.5h，残渣加7倍（V/W）80%丙酮溶液进行超声循环提取2次，每次1h，合并提取液，浓缩后上聚酰胺树脂柱，先用水和35%乙醇溶液洗脱，再用75%乙醇溶液洗脱，收集75%乙醇洗脱液，浓缩，与100-200目的硅胶按重量比1:1拌匀、阴干，上硅胶短粗柱，柱径高比为1:5，以乙酸乙酯-丙酮混合溶液为洗脱剂，依次按1:5、1:9、1:13体积比进行洗脱，收集含吉利柘树素A的洗脱液，回收试剂，将所得吉利柘树素A浓缩液置于结晶罐中静置24小时使其结晶，过滤，分出结晶，采用丙酮-正己烷（1:1）混合溶剂重结晶，滤出结晶，冷冻干燥即得吉利柘树素A1.3g，纯度为98.0%。

实施例3：