[发明专利]一种难溶于水的三维丝素蛋白支架及其制备与应用

权利要求书

1.一种难溶于水的三维丝素蛋白支架，其特征在于所述支架按如下方法制备：（1）以桑蚕蚕丝为原料，经脱胶、溶解、透析，获得截留液a，将截留液a或截留液a的浓缩液过滤或离心，取滤液或上层离心液得到丝素蛋白溶液；（2）将步骤（1）得到的丝素蛋白溶液的质量浓度用水调整至0.1~30%，倒入模具内，模具于-10~-80℃冷冻2~40h，再在-40~-110℃条件下真空冷冻干燥10~72h，在模具内形成三维丝素蛋白支架；（3）将模具在温度50~100℃，相对湿度70~100%条件下放置20~200min进行湿热交联，再在20~60℃烘干20~120min或在-40~-110℃冷冻干燥5~12h，去除模具，获得难溶于水的三维丝素蛋白支架。

2.如权利要求1所述的难溶于水的三维丝素蛋白支架，其特征在于步骤（2）所述模具在-20~-50℃冷冻5~15h，再在-60~-110℃条件下真空冷冻干燥16~48h，在模具内形成三维丝素蛋白支架。

3.如权利要求1所述的难溶于水的三维丝素蛋白支架，其特征在于步骤（2）所述模具内加入的丝素蛋白溶液体积量为100~20000ml/m²模具。

4.如权利要求1所述的难溶于水的三维丝素蛋白支架，其特征在于步骤（3）所述模具在温度65~70℃，相对湿度80~90%条件下放置100~120min进行湿热交联。

5.如权利要求1所述的难溶于水的三维丝素蛋白支架，其特征在于步骤（1）所述截留液a的浓缩液通过下述两种浓缩方法之一获得：（a）反渗透法：将透析后的透析袋放入质量浓度20~60%的聚乙二醇水溶液中，静置1~20h进行浓缩，获得截留液a的浓缩液；所述聚乙二醇平均分子量1000~10000；（b）溶剂挥发法：将截留液a在敞口容器内，于温度10~60℃，相对湿度10~60%的环境中静置2~30h，获得截留液a的浓缩液。

6.如权利要求1所述的难溶于水的三维丝素蛋白支架，其特征在于步骤（1）所述截留液a或截留液a的浓缩液过滤或离心方法为下列之一：a）将截留液a或截留液a的浓缩液于4℃、3000~6000g条件下离心5~20min，弃去沉淀，取上层溶液即为所述的丝素蛋白溶液；b）将截留液a或截留液a的浓缩液用孔径为2~20μm的滤器过滤，去除不溶性颗粒，滤液即为所述的丝素蛋白溶液。

7.如权利要求1所述的难溶于水的三维丝素蛋白支架，其特征在于步骤（1）所述脱胶、溶解、透析方法为：a）脱胶：将100g桑蚕蚕丝放入4~8L的2M碳酸钠水溶液中，90~100℃水浴20~60min，纯水清洗，该过程重复3次，脱去丝胶蛋白，留下丝素蛋白，将丝素蛋白在20~60℃烘干，获得干燥后的丝素蛋白；b）溶解：将上述干燥后的丝素蛋白溶于9~11M的溴化锂水溶液中，55~65℃水浴30~300min至丝素蛋白充分溶解，获得含丝素蛋白的混合液；所述干燥后的丝素蛋白与溴化锂水溶液的质量体积比为0.1~0.2:1；c）透析：将含丝素蛋白的混合液用截留分子量1000~20000道尔顿的透析袋进行透析，用10倍混合液体积的无菌去离子水作为透析液在3天透析10~12次，去除溶液中的溴化锂成分，获得截留液a。

8.如权利要求1~7之一所述的难溶于水的三维丝素蛋白支架在三维细胞培养载体、三维质粒转染载体、软骨支架、脂肪支架、骨支架或肌肉支架中的应用。