[发明专利]表达猪圆环病毒2型Cap蛋白的重组猪痘病毒载体疫苗及其制备方法

权利要求书

1.用于预防和/或治疗猪圆环病毒2型所致疾病的疫苗。

2. 权利要求1中所述的疫苗，其中含有重组猪痘病毒和药物学上可接受的载体或佐剂，该重组猪痘病毒包含猪痘病毒载体和猪圆环病毒2型的Cap蛋白编码基因。

3.权利要求1或2所述的疫苗，其中所述的猪圆环病毒2型Cap蛋白编码基因具有如SEQ ID NO: 3所示的核苷酸序列。

4.权利要求1至3中任一项所述的疫苗组合物，其中所述的猪痘病毒载体为VR-363。

5.一种猪圆环病毒2型的Cap蛋白的编码基因，其具有如SEQ ID NO: 3所示的核苷酸序列。

6.一种重组猪痘病毒，其中含有权利要求5所述的猪圆环病毒2型Cap蛋白编码基因。

7.权利要求6所述的重组猪痘病毒在制备用于预防和/或治疗猪圆环病毒2型引发疾病的药物中的用途。

8.权利要求5所述的用途，其中所述的猪圆环病毒2型引发疾病包括断奶仔猪多系统衰竭综合征（PMWS）、猪皮炎与肾病综合征（ PDNS）等疾病。

9.一种制备重组猪痘病毒的方法，该方法包括：

（1）利用特异性引物对扩增猪圆环病毒2型（PCV2）Cap蛋白的编码基因cap；

（2）把cap基因克隆入穿梭载体pUSG11/P28中，然后通过PCR和酶切鉴定，获得含有cap基因的穿梭载体pUSG11/P28C；

（3）让含有cap基因的穿梭载体pUSG11/P28C与猪痘病毒同源重组，获得重组猪痘病毒rSPV-cap；

（4）纯化重组猪痘病毒rSPV-cap。

10.权利要求7所述的方法，其中所述的特异性引物对的核苷酸序列分别如SEQ ID NO: 1和SEQ ID NO: 2所示；其中所述的让含有cap基因的穿梭载体pUSG11/P28C与猪痘病毒同源重组的具体操作为：用猪痘病毒（SPV）感染PK15单层细胞，2小时后用脂质体转染法加入穿梭载体pUSG11/P28C，二者发生同源重组，PK15细胞在常规条件下培养4天后，反复冻融3次，获得最初的重组猪痘病毒rSPV-cap；其中所述的纯化重组猪痘病毒rSPV-cap的具体操作为：将所述重组猪痘病毒rSPV-cap经倍比稀释，接种PK15单层细胞， 3-4天后在荧光显微镜下可观察到独立的绿色噬斑，挑取单独的病毒噬斑，适当稀释后再次接种PK15单层细胞，重复6次，直至最后得到的重组猪痘病毒能够稳定遗传。