[发明专利]一种促进胞外蛋白基质分泌的方法和其应用

权利要求书

1.一种促进胞外酶基质分泌的方法，其特征在于，将NCBI编号为AAZ54921的T.fusca角质酶基因和目标蛋白基因在宿主菌大肠杆菌中共表达，发酵培养并收集发酵上清液。

2.权利要求1所述的方法，其特征在于，具体方法为：

1)将Tfu_0883/pETDuet-1和含有目标蛋白基因的重组质粒pET20b(+)进行双酶切，连接酶连接过夜，连接产物转化E.coli JM109感受态细胞，得到含有目标蛋白基因的重组质粒Tfu_0883/pETDuet-1；

2)将含有目标蛋白基因的重组质粒Tfu_0883/pETDuet-1导入宿主大肠杆菌；

3)步骤2)构建的重组大肠杆菌发酵生产目标蛋白，收集发酵上清液。

3.权利要求1或2所述的方法，其特征在于，所述宿主大肠杆菌为E.coli BL21(DE3)、E.coli W3110、E.coli JM109、E.coli JM109(DE3)、E.coli DH5α中任意一种。

4.权利要求1或2所述的方法，其特征在于，所述目标蛋白为携带大肠杆菌特征性信号肽，通过大肠杆菌特定分泌途径分泌的蛋白。

5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于所述分泌途径为大肠杆菌I型-V型分泌途径中的任意一种。

6.权利要求2所述的方法，其特征在于，所述含有目标蛋白基因的重组质粒pET20b(+)为amy/pET20b(+)或xynA/pET20b(+)。

7.权利要求3所述的方法，其特征在于，所述宿主大肠杆菌为E.coli BL21(DE3)。

8.权利要求5所述的方法，其特征在于，所述分泌途径为SecB介导的II型分泌途径。

9.一种权利要求1所述方法在基质分泌胞外蛋白中的应用。