[发明专利]一种DNA文库及构建转录激活子样效应因子核酸酶质粒的方法

权利要求书

1.一种转录激活子样效应因子连接单元库，其特征在于，包括16组×n个双碱基识别模块和4组×m个单碱基识别模块，每个双碱基识别模块或单碱基识别模块两末端均有经二类限制性内切酶酶切形成第一粘性末端和第二粘性末端，n表示每组双碱基识别模块的数量，m表示每组单碱基识别模块的数量；m、n为自然数，且m≤n；

在同一组双碱基识别模块中，第i个双碱基识别模块的第二粘性末端与第i+1个双碱基识别模块的第一粘性末端互补；两组双碱基识别模块的粘性末端碱基序列一一对应相同，1≤i≤n-1；

在同一组单碱基识别模块中，第j个单碱基识别模块的第二粘性末端与第j+1个单碱基识别模块的第一粘性末端互补；一组单碱基识别模块的全部单碱基识别模块的粘性末端碱基序列与一组双碱基识别模块的部分或全部双碱基识别模块的粘性末端碱基序列一一对应相同，两组单碱基识别模块的粘性末端碱基序列一一对应相同，1≤j≤m-1。

2.如权利要求1所述的转录激活子样效应因子连接单元库，其特征在于，所述二类限制性内切酶为Bsa I。

3.如权利要求1所述的转录激活子样效应因子连接单元库，其特征在于，6≤n≤7。

4.如权利要求1所述的转录激活子样效应因子连接单元库，其特征在于，n大于7。

5.如权利要求4所述的转录激活子样效应因子连接单元库，其特征在于，n＝9，m＝7。

6.一种DNA文库，其特征在于，包括数量与权利要求1～5任一所述的转录激活子样效应因子连接单元库的连接单元数量相同的DNA片段，每个DNA片段包含一个碱基序列互异的连接单元，连接单元两末端与DNA片段的其余部分连接处有二类限制性内切酶酶切位点。

7.如权利要求6所述的DNA文库，其特征在于，所述DNA片段为重组质粒或PCR扩增产物。

8.如权利要求7所述的DNA文库，其特征在于，所述重组质粒的原始载体为PMD18-T载体。

9.一种构建转录激活子样效应因子核酸酶质粒的方法，包括：

(1)根据目的基因的靶序列确定识别模块，从如权利要求6所述的DNA文库中选取各识别模块对应的DNA片段；

(2)在同一体系内，采用二类限制性内切酶和DNA连接酶将各DNA片段中连接单元连接入带有DNA切割蛋白基因以及转录激活子样效应因子氨基酸序列框架N端和C端的载体中；

(3)用消化线性DNA的酶进行消化处理，得到转录激活子样效应因子核酸酶质粒。

10.如权利要求9所述的方法，其特征在于，步骤(2)中，所述的带有DNA切割蛋白以及转录激活子样效应因子氨基酸序列框架N端和C端的载体的碱基序列如SEQ ID NO.41或42所示。

11.如权利要求9所述的方法，其特征在于，步骤(2)中，以20μL连接体系计为：载体：40-200ng；识别模块：20-200ng/识别模块；二类限制性内切酶：0.5-2μL；DNA连接酶：0.5-2ul μL；DNA连接酶缓冲液：2μL；双蒸水：补足至20μL。