[发明专利]包含经修饰的免疫刺激性二核苷酸的基于寡核苷酸的化合物之免疫刺激特性

说明书

本申请是申请日为2005年11月7日、申请号为200580052484.3(国际申请号为PCT/US2005/042068)、发明名称为“包含经修饰的免疫刺激性二核苷酸的基于寡核苷酸的化合物之免疫刺激特性”的发明专利申请的分案申请。 

发明背景 

发明领域

本发明涉及利用寡核苷酸作为免疫刺激剂的免疫学和免疫治疗应用。 

相关领域的概述 

在现代分子生物学中寡核苷酸已经成为不可或缺的工具，应用于各种技术，包括从诊断探针方法到PCR到基因表达的反义抑制和免疫治疗应用。寡核苷酸的这种广泛使用导致对快速、廉价和高效合成寡核苷酸方法的需求不断增加。 

用于反义和诊断应用的寡核苷酸的合成现在可以常规地实现。参见，例如,Methods in Molecular Biology，Vol.20:Protocols for Oligonucleotides and Analogs pp.165-189(S.Agrawal,ed.,Humana Press,1993);Oligonucleotides and Analogues,A Practical Approach,pp.87-108(F.Eckstein,ed.,1991);和Uhlmann and Peyman,supra;Agrawal and Iyer,Curr.Op.in Biotech.6:12(1995);和Antisense Research and Applications(Crooke and Lebleu,eds.,CRC Press,Boca Raton,1993)。早期的合成方法包括磷酸二酯和磷酸三酯化学法。例如，Khorana等人,J.Molec.Biol.72:209(1972)公开了用于寡核苷酸合成的磷酸二酯化学法。Reese,Tetrahedron Lett.34:3143-3179(1978),公开了用于寡核苷酸和多核苷酸合成的磷酸三酯化学法。这些早期方法大部分已经被更有效的亚磷酰胺和H-膦酸酯(H-phosphonate)合成途径所取代。例如，Beaucage和Caruthers,Tetrahedron Lett.22:1859-1862(1981),公开了脱氧核糖核苷亚磷酰胺在多核苷酸合成中的用途。Agrawal和Zamecnik,美国专利5,149,798(1992), 公开了通过H-膦酸酯化合物方法的寡核苷酸优化合成。这两种现代方法已经用于合成具有各种修饰的核苷酸间联结的寡核苷酸。Agrawal和Goodchild,Tetrahedron Lett.28:3539-3542(1987),教导了利用亚磷酰胺化学法的寡核苷酸甲基膦酸酯合成。Connolly等人,Biochem.23:3443(1984),公开了利用亚磷酰胺化学法的寡核苷酸硫代磷酸酯合成。Jager等人,Biochem.27:7237(1988),公开了利用亚磷酰胺化学法的寡核苷酸氨基磷酸酯合成。Agrawal等人,Proc.Natl.Acad.Sci.(USA)85:7079-7083(1988),公开了利用H-膦酸酯化合物化学法的寡核苷酸氨基磷酸酯和硫代磷酸酯的合成。 

最近，若干研究人员已经证明寡核苷酸在免疫治疗应用中用作免疫刺激剂的有效性。磷酸二酯和硫代磷酸酯寡核苷酸能够诱导免疫刺激的观察结果引起了人们将这种副作用发展成为治疗手段的兴趣。这些努力聚焦于包含二核苷酸——天然CpG的硫代磷酸酯寡核苷酸。Kuramoto等人,Jpn.J.Cancer Res.83:1128-1131(1992)教导了包含含有CpG二核苷酸的回文结构的磷酸二酯寡核苷酸能够诱导干扰素-alpha和gamma的合成并增强天然杀伤活性。Krieg等人,Nature 371:546-549(1995)公开了包含硫代磷酸酯CpG的寡核苷酸具有免疫刺激活性。Liang等人,J.Clin.Invest.98:1119-1129(1996)公开了这类寡核苷酸活化人B细胞。Moldoveanu等人,Vaccine 16:1216-124(1998)教导了包含CpG的硫代磷酸酯寡核苷酸增强抗流感病毒的免疫应答。McCluskie和Davis,J.Immunol.161:4463-4466(1998)教导了包含CpG的寡核苷酸作为强力的佐剂，增强抗乙型肝炎表面抗原的免疫应答。Hartman等人,J.Immunol 164:1617-1624(2000)教导了免疫刺激序列是种属特异的，在小鼠和灵长类动物之间是不同的。