[发明专利]TMB显色体系

说明书

技术领域

本发明涉及生物体外诊断试剂，具体地说是TMB显色体系。

背景技术

建立高效稳定的酶联免疫检测ELISA (Enzyme-Linked-Immuno-Sorbent Assays)技术平台，是许多实验室和临床检验工作者多年来的夙愿。近年来，由于ELISA方法在临床检测及生物药物检测的广泛应用，检测要求从之前的定性检测发展到今天定量分析。随着这种检测要求的转化，对于检测方法的精准性和稳定性提出了更高要求。检测的数据质量也由之前的“差不多”发展到今天的“不能差”。为了保证ELISA方法的稳定可靠，需要很多环节的优化和密切配合，由于显色的质量直接影响到了ELISA方法的成败和检测的数据质量，因此，TMB显色剂配制虽然是该方法的最后一步，却是最关键的一步。

TMB即四甲基联苯胺（3,3’,5,5’-Tetramethylbenzidine）是一种脂溶性较强的物质，经与HRP作用后的产物显蓝色，目视对比鲜明。TMB性质较稳定，可配成溶液试剂，只需与H₂O₂溶液混和即成应用液，可直接作底物使用。另外，TMB又有无致癌性等优点，因此在ELISA中应用日趋广泛。反应后用HCL或H₂SO₄终止后，TMB产物由蓝色呈黄色，使用酶标仪进行检测，最适吸收波长为450nm。

目前TMB显色剂配制方法很多，市售的显色剂不仅价格昂贵，而且储存有效期短，在使用过程中对操作的准确性要求高；有很多实验室自行配制，但配制方法多种多样没有统一的标准和规范；在研究论文中使用的TMB显色剂也是五花八门，对于检测数据的对比及验证造成了困难。因此需要研制用于生物体外诊断的灵敏高效、稳定、易用及配置简单的TMB显色体系是当务之急。

发明内容

本发明的目的就是要提供一种适宜在实验室使用的灵敏高效、稳定、易用、配置简单且成本低廉的酶联免疫TMB显色体系。

本发明的目的是这样实现的：

本TMB显色体系，包括TMB储存液和TMB底物缓冲液母液，其中，所述TMB储存液由以下原料按如下重量体积比配制：

 TMB            4.5～5.2g

 DMSO         450mL

 甘油            50mL；

所述TMB底物缓冲液母液由以下原料按如下重量体积比配制：

醋酸钠·3H₂O          100～120g

柠檬酸·H₂O            90～110g

加入蒸馏水               800mL

用浓盐酸调节PH至3.0～4.0   

加入蒸馏水定容至1000 mL制得TMB底物缓冲液母液。

 本发明的TMB显色体系中，所述TMB储存液优选由以下原料按如下重量体积比配制：

 TMB            5.0g

 DMSO         450mL

 甘油            50mL；

所述TMB底物缓冲液母液优选由以下原料按如下重量体积比配制：

醋酸钠·3H₂O          113.0g

柠檬酸·H₂O            105.0g

加入蒸馏水               800mL

用浓盐酸调节PH至3.6   

加入蒸馏水定容至1000 mL制得TMB底物缓冲液母液。

本发明的TMB显色体系，可按以下方法配成显色剂：

①配制TMB底物缓冲液工作液

TMB底物缓冲液母液10mL

H₂O₂（30%）       0.30～0.40mL；

加入蒸馏水定容至1000 mL制得TMB底物缓冲液工作液；

②所述TMB储存液和所述TMB底物缓冲液工作液按体积比为20～100∶1000的比例混合制得TMB显色剂。

本发明的TMB显色体系，配制所述的TMB底物缓冲液工作液时，H₂O₂（30%）加入量优选为0.33mL。TMB储存液和TMB底物缓冲液工作液优选按体积比为1∶50的比例混合制得TMB显色剂。

TMB显色剂的配制方法包括以下步骤：