[发明专利]检测EGFR基因突变的引物、探针及其试剂盒和使用方法

权利要求书

1.一种检测人EGFR基因突变的引物和探针，其中，所述引物和探针的核苷酸序列为：

(1)用于检测18号外显子突变的引物和探针为：由SEQ ID NO∶1所示的上游引物，由SEQ ID NO∶2所示的下游引物，由SEQ ID NO∶3或SEQ ID NO∶27所示的探针；

(2)用于检测19号外显子突变的引物和探针为：由SEQ ID NO∶4所示的上游引物，由SEQ ID NO∶5～SEQ ID NO∶13所示的下游引物，由SEQ ID NO∶14所示的探针；

(3)用于检测20号外显子突变的引物和探针为：由SEQ ID NO∶15～SEQ ID NO∶17所示的上游引物，由SEQ ID NO∶18所示的下游引物，由SEQ ID NO∶19所示的探针；

(4)用于检测21号外显子突变的引物和探针为：由SEQ ID NO∶20所示的上游引物，由SEQ ID NO∶21所示的下游引物，由SEQ ID NO∶22～SEQ ID NO∶23所示的探针；

(5)作为内参的引物和探针：由SEQ ID NO∶24所示的上游引物，由SEQ ID NO∶25所示的下游引物，由SEQ ID NO∶26所示的探针；

其中，所述探针的核苷酸链的5’端均标记有FAM，3’端均标记有TAMRA。

2.一种含有权利要求1所述检测人EGFR基因突变的引物和探针的试剂盒，其特征在于，所述的试剂盒的组成为：所述的试剂盒包括核酸扩增试剂、对照品和测序试剂，其中，所述的核酸扩增试剂包括：

  序号  组份  组份中的主要成份  1  EGFR(exon18)PCR反应液 用于检测18号外显子突变的引物、探针、dNTPs、buffer  2  EGFR(exon19)PCR反应液 用于检测19号外显子突变的引物、探针、dNTPs、buffer  3  EGFR(exon20)PCR反应液 用于检测20号外显子突变的引物、探针、dNTPs、buffer  4  EGFR(exon21)PCR反应液 用于检测21号外显子突变的引物、探针、dNTPs、buffer  5  EGFR内参基因PCR反应液  作为内参的引物、探针、dNTPs、buffer  6  EGFR酶液  Taq酶、UNG酶。

3.根据权利要求2所述的检测EGFR基因突变检测试剂盒，其特征在于，所述各组核酸扩增试剂中各成分的含量为：含有6mmol/L引物各1ul、4mmol/L探针各1ul、5mM的dNTPs0.5ul、10×buffer2.5ul，加水至21μl；所述的EGFR酶液中含有Taq酶5u/管、UNG0.5u/管。