[发明专利]一种采用双生物酶修饰的明胶与壳聚糖共混生物材料及其制备方法与应用

权利要求书

1.一种采用双生物酶修饰的明胶与壳聚糖共混生物材料，其特征在于，所述双生物酶分别为微生物转谷氨酰胺酶和酪氨酸酶。

2.如权利要求1所述的采用双生物酶修饰的明胶与壳聚糖共混生物材料的制备方法，其特征在于，它包括如下具体步骤：

1）溶液的配制：

按明胶:去离子水=2～6g:50～100mL，选取明胶和去离子水，备用；将明胶加入到去离子水中，在40～60℃的水浴中搅拌1～2小时至明胶充分溶解后得到明胶溶液；

按壳聚糖:1%（体积百分比）乙酸溶液=1～2g:50～100mL，选取壳聚糖和乙酸溶液，备用；将壳聚糖加入到乙酸溶液中，室温下搅拌3～5小时至壳聚糖充分溶解，然后向溶液中滴加0.5～1.0mol/L氢氧化钠溶液，调节溶液的pH为5.0～6.0，得到壳聚糖溶液； 

按微生物转谷氨酰胺酶:去离子水=10～20U:5～10mL，选取微生物转谷氨酰胺酶和去离子水，备用；将微生物转谷氨酰胺酶加入到去离子水中，室温下搅拌15～30分钟充分溶解，再过滤得到微生物转谷氨酰胺酶溶液；

按酪氨酸酶：pH为7.0的PBS缓冲溶液=5000～10000U:5～10mL，选取酪氨酸酶和pH为7.0的PBS缓冲溶液，备用；将酪氨酸酶溶于所述pH为7.0的PBS缓冲溶液中，室温下搅拌2～5分钟至酪氨酸酶充分溶解后得到酪氨酸酶溶液； 

2）明胶与壳聚糖的共混：

按明胶溶液:壳聚糖溶液 =50～100mL:50～100mL，选取上述配制的明胶溶液和壳聚糖溶液，备用；将明胶溶液和壳聚糖溶液等体积混合，40～60℃下搅拌15～30分钟，使溶液混合均匀，得到明胶与壳聚糖共混溶液；

3）双生物酶修饰的明胶与壳聚糖共混材料的制备：

按明胶与壳聚糖共混溶液:微生物转谷氨酰胺酶：酪氨酸酶=50～100mL:3～8U:3000～7000U，选取上述明胶与壳聚糖共混溶液、微生物转谷氨酰胺酶和酪氨酸酶，备用；向明胶与壳聚糖共混溶液中加入上述微生物转谷氨酰胺酶和酪氨酸酶，在28～30℃下搅拌反应10～20分钟，将反应液倒入培养皿中，在室温下通风干燥48～72小时，得到双生物酶修饰的明胶与壳聚糖共混材料膜片，然后将膜片在0.1～0.5mol/L氢氧化钠溶液中浸泡0.5～1小时，再用去离子水冲洗膜片, 30～40℃下干燥12～24小时，得到所述采用双生物酶修饰的明胶与壳聚糖共混生物材料。

3.如权利要求1所述的采用双生物酶修饰的明胶与壳聚糖共混生物材料在皮肤敷料、伤口愈合剂，或人工皮肤方面的应用。