[发明专利]香精香料中香豆素和黄樟素含量的测定方法

权利要求书

1.一种香精香料中香豆素和黄樟素含量的测定方法，包括以下步骤：

1）萃取液：无水乙醇；

2）内标溶液的配制：在无水乙醇中加入甲基丁香酚，配制浓度为10mg/ml的内标储备液，置于4℃下保存，有效期3个月，使用时再将内标储备液稀释1000倍，配制成浓度为10μg/ml的内标溶液；

3）标准工作溶液的配制：取香豆素0.1g，黄樟素0.01g，精确至0.0001g，以无水乙醇定容至100ml，得到香豆素和黄樟素混合储备液，浓度分别为1mg/ml，0.1mg/ml，置于4℃下保存，有效期3个月，将混合储备液逐级稀释配制含香豆素和黄樟素的标准工作液；

4）标准工作曲线绘制：对配制的标准工作溶液进行气相色谱和质谱选择离子测定，进样量1μl，计算每个标准工作溶液中香豆素、黄樟素与内标的峰面积比，以峰面积比为纵坐标，以香豆素、黄樟素质量为横坐标，绘制过原点标准工作曲线，得出回归方程，相关系数R²≧0.999；

5）样品的处理：称取1.0g烟用香精香料于50ml三角瓶中，用5ml甲基丁香酚内标溶液溶解，振荡，静置，取上层清液，经过滤，得到待测样品溶液；

6）样品的测定：取0.5ml～1.0ml待测样品溶液于气质联用仪进样瓶中，选择甲基丁香酚、香豆素和黄樟素质荷比m/z分别为178、146、162的离子进行定量分析，使用内标法绘制标准工作曲线，试样与标准工作曲线拟合，得出试样香豆素和黄樟素含量；

7）结果的计算与表述：样品中的香豆素、黄樟素的含量(W)由下式计算得出：

W=M/m，式中：W—样品中香豆素、黄樟素的含量，单位为mg/kg，M—根据计算结果，从标准工作曲线上读取的样品溶液中香豆素、黄樟素的量，单位为mg，m—样品的质量，单位为kg。

2.根据权利要求1所述的香精香料中香豆素和黄樟素含量的测定方法，其特征在于：无水乙醇为美国Fisher公司产HPLC Grade A995-4。

3.根据权利要求1所述的香精香料中香豆素和黄樟素含量的测定方法，其特征在于：在步骤3）中，将混合储备液中香豆素溶度逐级稀释成0.5μg/ml，1 μg/ml ，2 μg/ml，5 μg/ml，10 μg/ml，20 μg/ml，40 μg/ml，7个不同浓度水平，则这7级混合标准工作溶液中黄樟素浓度水平分别为0.05 μg/ml，0.1 μg/ml，0.2 μg/ml，0.5 μg/ml，1 μg/ml，2 μg/ml，4 μg/ml，从这7级浓度的标准工作溶液中分别移取1ml，各加入甲基丁香酚内标溶液5ml，摇匀，用直径0.45μm有机微孔滤膜过滤，制备7级加内标标准工作溶液，进样后制定标准工作曲线。

4.根据权利要求1所述的香精香料中香豆素和黄樟素含量的测定方法，其特征在于：在步骤5）中，难溶于乙醇的样品可在水浴超声波中超声10min，静置时可用离心机加速分层，过滤时用直径0.45μm有机微孔滤膜。

5.根据权利要求1所述的香精香料中香豆素和黄樟素含量的测定方法，其特征在于：在步骤6）中，气质联用仪的色谱条件：使用安捷伦公司型号为HP-INNOWAX的色谱柱，载气为高纯氦，柱流速为1.0ml/min恒流，进样量为1μl，分流进样，分流比为10:1，进样口温度为250℃，程序升温为柱初始温度100℃，保持5min，以5℃/min的速率升至140℃，保持5min，然后以10℃/min的速率升至240℃，保持7min.，气质联用仪的质谱条件：传输线温度为260℃，离子源温度为230℃，四极杆温度为150℃，电离能量为70eV，溶剂延迟10min，全扫描时间范围为10min-35min，定量使用选择离子模式，通过选择特征离子进行定量：黄樟素的质荷比m/z 162，甲基丁香酚的质荷比m/z 178，香豆素的质荷比m/z 146，以标准样品的保留时间和检测离子丰度定性：黄樟素m/z131/162约等于40%，扫描时段10.00min—19.00min；甲基丁香酚m/z147/178约等于30%，扫描时段19.00 min—24.00 min；香豆素m/z118/146约等于110%，扫描时段24min—34.00min。