[发明专利]表达分泌型鸭坦布苏病毒E蛋白的重组鸭病毒性肠炎病毒疫苗的构建和应用

权利要求书

1.表达分泌型鸭坦布苏病毒E蛋白的重组鸭病毒性肠炎病毒疫苗株，其保藏编号为CCTCC V201214。

2.根据权利要求1所述的表达分泌型鸭坦布苏病毒E蛋白的重组鸭病毒性肠炎病毒疫苗株，其中在鸭病毒性肠炎病毒DEV基因组的US7和US8基因之间的间隔区中插入包含鸭坦布苏病毒E基因和SV40启动子序列的基因片段，所述基因片段的核苷酸序列为SEQ ID NO：1。

3.根据权利要求1或2所述的表达分泌型鸭坦布苏病毒E蛋白的重组鸭病毒性肠炎病毒疫苗株，其中所述鸭坦布苏病毒E基因来源于PTD2010株病毒。

4.根据权利要求2所述的表达分泌型鸭坦布苏病毒E蛋白的重组鸭病毒性肠炎病毒疫苗株，其中所述包含鸭坦布苏病毒E基因和SV40启动子序列的基因片段替换所述鸭病毒性肠炎病毒基因组的US7和US8基因之间的间隔区的第108至111位的四核苷酸片段。

5.根据权利要求2所述的表达分泌型鸭坦布苏病毒E蛋白的重组鸭病毒性肠炎病毒疫苗株，其中所述SV40启动子序列来源于包含SV40启动子的质粒，例如pSI质粒。

6.构建权利要求1所述的表达分泌型鸭坦布苏病毒E蛋白的重组鸭病毒性肠炎病毒疫苗株的方法，所述方法包括下述步骤：

(1)构建鸭病毒性肠炎病毒DEV基因组的Fosmid文库，并从中选择用于拯救鸭病毒性肠炎病毒的5粘粒组合系统，将它们分别命名为pFOS1、pFOS2、pFOS3、pFOS4、pFOS5，其中pFOS5粘粒包含鸭病毒性肠炎病毒基因组中的US7和US8基因以及它们之间的间隔区；

(2)利用步骤(1)中获得的包含鸭病毒性肠炎病毒基因组中的US7和US8基因以及它们之间的间隔区的粘粒pFOS5，在该粘粒的US7和US8基因之间的间隔区中插入包含鸭坦布苏病毒E基因和SV40启动子序列的基因片段SEQ ID NO：1，构建重组突变粘粒；和

(3)利用步骤(2)中获得的重组突变粘粒和步骤(1)中获得的5粘粒组合系统中的pFOS1、pFOS2、pFOS3和pFOS4共转染次代鸡胚成纤维细胞CEF，拯救出重组病毒株CCTCC V201214，将其命名为rDEV-TE-tPAS。

7.根据权利要求6所述的方法，其中步骤(1)中得到的5粘粒组合系统中的每一个粘粒克隆所包含的鸭病毒性肠炎病毒DNA片段两端都含有Fse I-Sbf I-Pme I接头，相互重叠，并且拼接覆盖鸭病毒性肠炎病毒全基因组。

8.权利要求1所述的表达分泌型鸭坦布苏病毒E蛋白的重组鸭病毒性肠炎病毒疫苗株的应用，其用于制备预防鸭病毒性肠炎病毒和鸭坦布苏病毒引起的传染病的疫苗。

9.根据权利要求8所述的应用，其中所述鸭病毒性肠炎病毒和鸭坦布苏病毒引起的传染病包括鸭病毒性肠炎和鸭坦布苏病毒病。

10.一种疫苗，其包括权利要求1所述的表达分泌型鸭坦布苏病毒E蛋白的重组鸭病毒性肠炎病毒疫苗株CCTCC V201214，以及药用佐剂、赋形剂。