[发明专利]山梨糖脱氢酶基因、山梨酮脱氢酶基因与吡咯喹啉醌合成基因簇ABCDEN的组合基因

说明书

技术领域

本发明属于工业微生物领域，涉及山梨糖脱氢酶基因、山梨酮脱氢酶基因与吡咯喹啉醌合成基因簇ABCDEN的组合基因。 

背景技术

维生素C（Vc）又名抗坏血酸，是机体营养、生长所必需的一种微量水溶性维生素，在抗氧化和维持新陈代谢平衡等方面起着重要的作用，广泛应用于制药工业、食品工业、化妆品工业和饲料工业等，其应用范围不断扩展，市场需求稳定。 

在工业生产中，维生素C主要通过“二步发酵法”生产，即第一步发酵使用黑醋杆菌将D-山梨醇转化为L-山梨糖，第二步发酵使用氧化葡糖杆菌（Gluconobacter oxydans）和巨大芽孢杆菌(Bacillus megaterium)混合发酵将L-山梨糖转化为维生素C的前体2-酮基-L-古龙酸（2-KLG）。其中氧化葡糖杆菌为产酸菌，但单独培养生长和产酸能力很弱，需在伴生菌巨大芽孢杆菌促进下完成生长和产酸过程。两菌混合发酵生产2-酮基-L-古龙酸的效率尚有提升空间，而提高产酸菌氧化葡糖杆菌的糖酸转化能力是提高混菌发酵生产效率的关键。 

发明内容

本发明的目的是克服现有技术的不足，提供一种山梨糖脱氢酶基因与吡咯喹啉醌合成基因簇ABCDEN的组合基因。 

本发明的第二个目的是提供一种山梨酮脱氢酶基因与吡咯喹啉醌合成基因簇ABCDEN的组合基因。 

本发明的第三个目的是提供一种山梨糖脱氢酶基因、山梨酮脱氢酶基因与吡咯喹啉醌合成基因簇ABCDEN的组合基因。 

本发明的第四个目的是提供一种含有山梨糖脱氢酶基因与吡咯喹啉醌合成基因簇ABCDEN组合基因的转化宿主细胞。 

本发明的第五个目的是提供一种含有山梨酮脱氢酶基因与吡咯喹啉醌合成基因簇ABCDEN组合基因的转化宿主细胞。 

本发明的第六个目的是提供一种含有山梨糖脱氢酶基因、山梨酮脱氢酶基因与吡咯喹啉醌合成基因簇ABCDEN的组合基因的转化宿主细胞。 

本发明的技术方案概述如下： 

一种山梨糖脱氢酶基因与吡咯喹啉醌合成基因簇ABCDEN的组合基因，它是列序表中SEQ ID No.4所述核苷酸序列。 

一种山梨酮脱氢酶基因与吡咯喹啉醌合成基因簇ABCDEN的组合基因，它是序列表中 SEQ ID No.5所述核苷酸序列。 

一种山梨糖脱氢酶基因、山梨酮脱氢酶基因与吡咯喹啉醌合成基因簇ABCDEN的组合基因，它是序列表中SEQ ID No.6所述核苷酸序列。 

一种含有山梨糖脱氢酶基因与吡咯喹啉醌合成基因簇ABCDEN组合基因的转化宿主细胞，是将含有序列表中SEQ ID No.4核苷酸序列的重组载体导入到宿主氧化葡糖杆菌得到的转化宿主细胞。 

一种含有山梨酮脱氢酶基因与吡咯喹啉醌合成基因簇ABCDEN组合基因的转化宿主细胞，是将含有序列表中SEQ ID No.5核苷酸序列的重组载体导入到宿主氧化葡糖杆菌得到的转化宿主细胞。 

一种含有山梨糖脱氢酶基因、山梨酮脱氢酶基因与吡咯喹啉醌合成基因簇ABCDEN的组合基因的转化宿主细胞，是将含有序列表中SEQ ID No.6核苷酸序列的重组载体导入到宿主氧化葡糖杆菌得到的转化宿主细胞。 

本发明的方法通过构建山梨糖脱氢酶基因、山梨酮脱氢酶基因与吡咯喹啉醌合成基因簇ABCDEN不同组合方式的氧化葡糖杆菌重组菌，能明显提高与巨大芽孢杆菌混合培养中的2-酮基-L-古龙酸的产量，最高能提高20%。 

附图说明

图1为原始氧化葡糖杆菌及3种含有重组载体的氧化葡糖杆菌分别与巨大芽孢杆菌混菌发酵结果。 

具体实施方式

下面结合具体实施例对本发明作进一步的说明。下面的内容及实施例是为了使本领域的技术人员能够更好地理解本发明，但并不用于限制本发明。