[发明专利]一种HIV-1肽Env120-128特异性TCR、其重组逆转录病毒载体与应用

说明书

技术领域

本发明属于生物工程领域，具体涉及一种HIV-1肽特异性T细胞受体（TCR），以及利用该TCR制备得到的一种用于艾滋及艾滋/结核共感染疾病基因治疗的逆转录病毒载体，逆转录病毒载体转染得到的CD8⁺T细胞及其在制备抗艾滋及艾滋/结核共感染疾病药物中的应用。

背景技术

人类免疫缺陷病毒（Human Immunodeficiency Virus，HIV）即艾滋病病毒，入侵人体后将严重破坏人体免疫力，使各种罕见感染及癌症得以在人体内发生，最终形成艾滋病（获得性免疫缺陷综合症）。HIV主要存在于HIV感染者或艾滋病患者体液中，任何能够引起体液交换的行为都有传播HIV的可能，包括性接触传播、血液传播及母婴传播。自上世纪80年代HIV开始在人类中传播以来，将近6000万人感染，其中2500万人死亡。

目前尚无可根除HIV、根治艾滋病的药物，也没有证据表明人体会对HIV产生保护性免疫，因此大多数艾滋病病人死于反复继发感染及肿瘤。艾滋病的治疗一方面是抑制病毒在体内的繁殖，增强免疫功能；另一方面是防治机会性感染，缓解症状，延长生命。早期治疗和预防其它感染可延缓病程发展，提高生活质量。目前临床上常用的治疗方法有以下几个方面：（1）联合使用几种抗逆转录毒药物的“鸡尾酒疗法”实施抗逆转录病毒治疗，其在降低发病率和病死率、提高生活质量方面有明显作用；（2）针对各种机会性感染的抗生素对症治疗与预防，包括肿瘤的化疗和对症治疗；（3）其他，包括免疫调节治疗、营养支持治疗和中医药治疗等。

HIV-1肽Env_120-128，即艾滋病病毒HIV-1包膜蛋白gp160的第120-128位氨基酸构成的肽表位（KLTPLCVTL），存在于80%的多变性HIV-1肽序列中，在HIV-1 B亚型病毒株中具有最高度的保守性，可被表达HLA-A*0201的个体识别。

T细胞抗原受体（T cell receptor, TCR）是所有T细胞表面的特征性标志，在T细胞抗原识别中起关键作用。TCR是由α、β两条肽链构成的异二聚体，每条肽链又可分为可变区（V区），恒定区（C区），跨膜区和胞质区等几部分；其胞质区很短，信号传递主要通过与其以非共价键结合的CD3分子进行。TCR分子属于免疫球蛋白超家族，其抗原特异性存在于V区；V区（Vα、Vβ）又各有三个高变区CDR1、CDR2、CDR3，其中以CDR3变异最大，直接决定了TCR的抗原结合特异性。在TCR识别MHC-抗原肽复合体时，CDR1、CDR2识别和结合MHC分子抗原结合槽的侧壁，而CDR3直接与抗原肽相结合。

根据TCR Vα、Vβ基因的同源性，可将80多个TCR Vα基因分为32个家族、60多个TCR Vβ基因分为24个家族。利用每个T细胞克隆均有其独特CDR3序列的特点，采用CDR3谱型分析技术，可测定各TCR家族各CDR3出现的频率，由此反映T细胞的克隆性。未接受抗原刺激的T细胞中，针对各种抗原的T细胞克隆分布均匀，表现为多家族和多克隆性，具体地，表现为各家族均出现呈高斯分布的约8个CDR3峰；抗原刺激则引起识别该抗原的某一个或几个特异TCR家族T细胞反应性增生，表现为该家族CDR3成员出现少于4个峰的寡克隆或单克隆分布，其中具有单克隆CDR3分布（表现为单峰）的TCR家族即是抗原特异单克隆增生的TCR家族。对该家族PCR产物进行测序，可获得抗原特异TCR CDR3序列。

发明内容

本发明的目的在于：筛选出HIV-1肽Env_120-128 (KLTPLCVTL)特异的TCR基因，利用逆转录病毒载体将其转染到CD8⁺ T细胞中，获得表达HIV-1肽Env_120-128特异TCR的CD8⁺ T细胞，以及该经过TCR基因修饰的CD8⁺ T细胞在制备抗HIV药物中的应用。

本发明所采用的技术方案是：

HIV-1肽Env_120-128特异性T细胞受体（TCR），包括α链和β链，其中，α链的CDR3区含有SEQ ID NO: 3所述的序列；β链的CDR3区含有SEQ ID NO: 4所示的序列。