[发明专利]一种降低刺激的发酵烟叶提取物的制备方法及其在重组烟叶中的应用

说明书

技术领域

本发明涉及重组烟叶添加剂技术领域，具体是指一种降低刺激的发酵烟叶提取物的制备方法及其在重组烟叶中的应用。

背景技术

重组烟叶又称再造烟叶或均质烟叶，主要由烟末、碎片、烟梗或低次烟叶加入胶粘剂和其他添加剂等组成。国内现有的造纸法薄片生产工艺将烟叶和烟梗中的水溶性物质用水萃取，经固液分离后，固体部分经制浆后再制成纸基，而液体部分则浓缩后回涂到纸基上。这种生产工艺在很大程度上只是一个原材料的物理重组过程。就其化学组成而言，用该方法所得到的重组烟叶与作为原料的烟叶、烟梗差别不大。这样导致重组烟叶存在杂气重、刺激性大和口感不适等吸味缺陷，影响了重组烟叶在卷烟产品中的使用效果和添加量。国内通常的做法是采用加料的办法来改善部分不足之处，其中也采用烟草类提取物作为添加剂对重组烟叶进行加香加料，但是这种传统的化学方法对重组烟叶质量的改善程度非常有限，难以解决重组烟叶质量的一些深层次的问题。针对这一现象，改善重组烟叶的质量和使用价值已经成为这一领域的重大课题之一。

烟用较多的烟草类提取物一般采用传统方法制得，即采用单体烟叶或复配的叶组为原料通过水、醇提取或分子蒸馏得到，这样提取的烟草类提取物香气特征较弱，添加后对卷烟的改善有一定局限。采用微生物菌株发酵烟草提取物生产重组烟叶用天然生物香料，还未见报道。

微生物在增殖过程中可产生庞大的高活性酶系，如多糖水解酶类、蛋白酶类、酯化酶类、氧化还原酶类及裂合酶类等，在酶促作用、化学作用及微生物体内复杂代谢的协同作用下，以烟叶为原料发生分解、降解、氧化、还原、聚合、偶联、转化等作用，形成复杂的低分子化合物，其中包括各种香味化合物，如醇类、醛类、酮类、酸类、脂类、酚类、吡喃类、吡啶类和萜烯类等，这些香气物质是烟草或用于烟草的添加剂的香气组分，对重组烟叶的烟香进行特征强化、改善口感。采用微生物发酵技术生产烟用香料，天然绿色环保无害，工艺过程简单易操作，不产生有毒副产品、无污染等。现有技术中，利用植生拉乌尔菌对刺激的烟叶提取物进行生物转化生产烟用香料的方法未见报道。

发明内容

本发明针对目前重组烟叶存在杂气重、刺激性大和口感不适等吸味缺陷，提供了一种降低刺激的发酵烟叶提取物的制备方法及其在重组烟叶中的应用。本发明制成的由植生拉乌尔菌生物转化生成降低烟气刺激的发酵烟叶提取物，改善了重组烟叶刺激大、口感不适的吸味缺陷，能与其它烟用香精香料混合调配使用。

本发明提供一种植生拉乌尔菌，该菌株名为Raoultella planticola VP4-4，于2012年1月11日保藏于武汉大学中国典型培养物保藏中心，保藏号为CCTCC M 2012005，植生拉乌尔菌Raoultella planticola VP4-4 CCTCC M 2012005的生物学特征是：革兰氏阴性菌，能产酸、使牛奶液化并生成吲哚产生、赖氨酸脱羧酶实验呈阳性；鸟氨酸脱羧酶实验、H2S产生、明胶液化呈阴性；能以单糖，多糖、酯类和氨基酸为唯一碳源生长，

所述植生拉乌尔菌Raoultella planticola VP4-4的分子鉴定特征为：其16SrRNA序列全长1408bp，16S rRNA序列与Raoultella planticola的相似度达到99.563%。

本发明提供一种降低刺激的发酵烟叶提取物的制备方法，它包括以下步骤：

1）将烟叶粉碎至50~100目，再将烟末和水按质量比1∶20~60回流提取1~3h后过滤，重复1~3次回流提取滤液，合并滤液，即得烟叶提取液，并灭菌；

2）菌种活化：将植生拉乌尔菌 Raoultella planticola VP4-4 CCTCC M 2012005接种到斜面培养基上，在25~38℃，静置培养24~72h后得到活化菌种，置于冰箱中；

3）制备种子培养液：将步骤2）中所得的活化菌种，接种到种子培养基，在25~38℃条件下，100~150r/min振荡培养24h~72h，连续转接1~3次，制得种子培养液；

4）发酵：将种子培养液按体积比2~20%接种到上述步骤1）中的灭菌的烟叶提取液，接种后的烟叶提取液的装罐量为20~40%，pH5~8，温度30~40℃，转速100~200r/min，不避光条件下发酵3~7天，得到发酵液；

5）将发酵液和95%乙醇按体积比1∶2~6，沉淀过夜，4000~10000r/min离心10~30min，过滤后减压浓缩至相对密度为1.0112~1.0633的浸膏，即得降低刺激的发酵烟叶提取物。