[发明专利]检测新布尼亚病毒的试剂盒和寡核苷酸有效
申请号: | 201210324676.7 | 申请日: | 2012-09-04 |
公开(公告)号: | CN102787177A | 公开(公告)日: | 2012-11-21 |
发明(设计)人: | 田洁;贾娜;刘艳华;郭惠琳;王艺凯;任彤;张丽杰;江佳富 | 申请(专利权)人: | 中华人民共和国北京出入境检验检疫局 |
主分类号: | C12Q1/70 | 分类号: | C12Q1/70;C12Q1/68;C12N15/11;C12R1/93 |
代理公司: | 北京正理专利代理有限公司 11257 | 代理人: | 赵晓丹 |
地址: | 100026*** | 国省代码: | 北京;11 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 检测 新布尼亚 病毒 试剂盒 寡核苷酸 | ||
1.一组检测新布尼亚病毒的寡核苷酸,其特征在于:由序列表SEQ ID No.1至序列表SEQ ID No.2所示碱基序列的寡核苷酸组成;其中SEQ ID No.1为上游引物,SEQ ID No.2为下游引物。
2.一种检测新布尼亚病毒的试剂盒,其特征在于,由以下组分组成:
1)RT-PCR反应液,其包括:Takara ExTag HS Mix、PrimerScript PLUS RTase、缓冲液、上游引物、下游引物、Rox染料;
2)DEPC水;
3)阴性对照:不含布尼亚病毒的蜱cDNA;
4)阳性对照:布尼亚病毒cDNA或含布尼亚病毒目的基因的质粒,
其中,上游引物是序列表SEQ ID No.1所示的核苷酸序列,下游引物是序列表SEQ ID No.2所示的核苷酸序列。
3.根据权利要求2所述的试剂盒,其特征在于,所述RT-PCR反应液包括:0.06μMTakara ExTag HS Mix、0.02μM PrimerScript PLUS RTase、1×缓冲液、0.4μM上游引物、0.4μM下游引物和1×Rox染料。
4.一种检测新布尼亚病毒的方法,其特征在于,该方法包括以下步骤:
1)提取待检样品的RNA;
2)进行SYBR Green荧光定量RT-PCR扩增反应,其中,使用的引物为序列表SEQ ID No.1所示的上游引物和序列表SEQ ID No.2所示的下游引物;
3)进行结果判定,无Ct值或Ct值>36,且无明显扩增曲线为阴性;Ct值≤35,并有明显扩增曲线为阳性。
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