[发明专利]一种动物呼吸道特异性启动子及其应用

说明书

技术领域

本发明涉及一种动物呼吸道特异性启动子及其应用，特别涉及一种来源于猪的动物呼吸道特异性启动子及其应用。

背景技术

长期以来我国的猪群存栏与产量一直处于世界领先地位。随着养殖业规模的扩大化、集约化，动物饲养密度不断增加，动物疫病感染状况日益复杂，动物疫病的发生和流行严重制约着我国养殖业的进一步发展和壮大。当前猪场传染病发生日益严重，且发病面广、传染快、流行蔓延迅速、死亡率极高。据资料统计，自20世纪70年代以来新增加猪传染病有21种，其中90年代以来新增加7种。猪的多种传染病的发生和流行，严重打击了农民养猪的积极性，阻碍了养猪业的发展。通过呼吸系统传播的疾病占绝大多数，包括猪气喘病、猪副嗜血杆菌病、猪链球菌病，猪肺疫、猪传染性胸膜肺炎、猪传染性萎缩性鼻炎、猪沙门氏菌病、猪流感、猪繁殖与呼吸综合症、猪圆环病毒病、猪附红细胞体病、弓形虫病等。如果能够通过抗病育种的方法，培育抗呼吸系统传染病的转基因猪，减少呼吸系统传染病的发生，将对我国的养猪业带来巨大的经济效益。

转基因技术的关键在于使外源目的基因在转基因动物体内稳定高效的表达，而转基因表达所用的启动子起着非常重要的作用。启动子是一段能使基因进行转录的DNA序列，转录的RNA通过进一步的翻译和修饰形成功能蛋白质。根据启动子作用的方式及功能不同，可以大致分为4类：组成型启动子、诱导型启动子、组织或发育阶段特异型启动子和合成型启动子。外源基因在组织或发育阶段特异型启动子的调控下，能够在某些特定的组织器官中表达。如果采用呼吸道特异表达的启动子，利用转基因技术将抗病基因在猪呼吸道特异表达，培育出能够抗呼吸系统传播疾病的转基因猪，将在猪的遗传改良中具有重大意义。

目前已有一些组织特异性启动子被应用于植物的遗传改良中，获得了显著的成效。然而猪组织特异性启动子的研究却相对滞后，目前报道的猪组织特异性启动子寥寥无几。

发明内容

本发明的目的是提供一种动物呼吸道特异性启动子及其应用。

本发明所提供的动物呼吸道特异性启动子来源于猪（Sus scrofa domastica L.），是下述a）或b）或c）的DNA片段：

a）3′端至少含有序列表中序列1的第1701-2900位核苷酸序列（LUNX1200），并且从序列1的第1701位开始、按照序列1的核苷酸序列向序列1的5′端延长，得到长度为1200bp至2900bp的任意一个DNA片段；所述DNA分子具有启动子功能；

b）与a）限定的核苷酸序列具有75%或75%以上同源性，且具有启动子功能的DNA片段；

c）在严格条件下与a）或b）限定的核苷酸序列杂交，且具有启动子功能的DNA片段。

所述严格条件是在2×SSC，0.1%SDS的溶液中，在68℃下杂交并洗膜2次。每次5min.0.5X SSC，0.1%SDS的溶液中，在68℃下杂交并洗膜2次。每次15min。

所述启动子的最后一位核苷酸是序列1的第2900位。

所述启动子为下述1）-5）中任一种：

1）核苷酸序列的3′端至少含有序列表中序列1的第1401-2900位核苷酸序列（LUNX1500），并且从序列1的第1401位开始、按照序列1的核苷酸序列向序列1的5′端延长，得到长度为1500至2900bp的任意一个DNA片段；

2）核苷酸序列的3′端至少含有序列表中序列1的第1201-2900位核苷酸序列（LUNX1700），并且从序列1的第1201位开始、按照序列1的核苷酸序列向序列1的5′端延长，得到长度为1700至2900bp的任意一个DNA片段；

3）核苷酸序列的3′端至少含有序列表中序列1的第901-2900位核苷酸序列（LUNX2000），并且从序列1的第901位开始、按照序列1的核苷酸序列向序列1的5′端延长，得到长度为2000至2900bp的任意一个DNA片段；

4）核苷酸序列的3′端至少含有序列表中序列1的第601-2900位核苷酸序列（LUNX2300），并且从序列1的第601位开始、按照序列1的核苷酸序列向序列1的5′端延长，得到长度为2300至2900bp的任意一个DNA片段；

5）核苷酸序列的3′端至少含有序列表中序列1的第301-2900位核苷酸序列（LUNX2600），并且从序列1的第301位开始、按照序列1的核苷酸序列向序列1的5′端延长，得到长度为2600至2900bp的任意一个DNA片段。