[发明专利]一种枯草芽孢杆菌、利用此菌制备的微生物肥料及其制备方法以及此微生物肥料的应用

权利要求书

1.一种枯草芽孢杆菌（Bacillus  subtilis G-1），其特征在于，所述枯草芽孢杆菌于2012年7月16日在湖北武汉武昌路珈山武汉大学中国典型培养物保藏中心保藏，保藏号为CCTCC M 2012287。

2.一种枯草芽孢杆菌微生物肥料，其特征在于，该微生物肥料由枯草芽孢杆菌CCTCC M 2012287经培养发酵后与硅藻上混合、干燥、粉碎而得。

3.权利要求2所述枯草芽孢杆菌微生物肥料的制备方法，其特征在于，由如下方法制备而成：

1)菌种固体斜面培养：将枯草芽孢杆菌CCTCC M 2012287菌种接入固体斜面，在斜面培养基中培养，温度为30-35℃，培养时间16-24小时；

2)一级种子液扩大培养：将步骤1)的枯草芽孢杆菌接种到盛有1000ml-级种子液培养基中摇瓶培养16-24小时，培养温度30-35℃，转速200-300转/分；

3)二级种子液发酵培养：按1％接种量将步骤2)种子液接种到200升种子发酵罐中，培养基采用优化培养基，在30-35℃保温培养16-20个小时，同时辅以转速200-300转/分，通气量0.5-0.8立方米/分钟，进行发酵培养；

4)三级种子液发酵培养：按10％的接种量将步骤3)的种子液接种到2000升的大发酵罐中，培养基同步骤3)，进行变温变通气量条件下培养，当菌体芽孢形成率达到75％并有20％形成独立芽孢后，发酵过程结束；

5)微生物肥料的制备：发酵液与硅藻土按质量比5∶2-5∶3混合，将混合物置入隧道式干燥设备内，在70℃干热空气下进行3-4小时干燥，当混合物水分小于5％时烘干结束，粉碎后过100目筛并包装，微生物肥料制备完成。

4.根据权利要求3枯草芽孢杆菌微生物肥料的制备方法，其特征在于，所述制备步骤1-4中的培养基均采用以下条件灭菌，灭菌温度121-125℃，15-20 分钟。

5.根据权利要求3枯草芽孢杆菌微生物肥料的制备方法，其特征在于，制备步骤4中所述变温变通气量的培养条件为，先30-35℃、通气量0.5-0.8立方米/分钟、培养20小时，再升温到37℃、通气量加大到1.0立方米/分钟、再培养10-12小时，辅以转速200-300转/分进行培养。

6.根据权利要求3枯草芽孢杆菌微生物肥料的制备方法，其特征在于，制备步骤1)中斜面培养基配方为蛋白胨10g，酵母粉5g，氯化钠10g，琼脂20g，蒸馏水1000ml，自然pH值。

7.根据权利要求3枯草芽孢杆菌微生物肥料的制备方法，其特征在于，制备步骤2)中一级种子液培养基配方为蛋白胨10g，酵母粉5g，氯化钠10g，蒸馏水1000ml，自然pH值。

8.根据权利要求3枯草芽孢杆菌微生物肥料的制备方法，其特征在于，制备步骤3)或4)中，所述优化培养基配方如下，玉米粉1.0-2.0％，麸皮0.1-0.5％，酵母粉0.1-0.5％，磷酸氢二铵0.01-0.05％，磷酸氢二钠0.02-0.08％，磷酸二氢钾0.05-0.08％，硫酸钠0.03-0.05％，硝酸钠0.01-0.05％，硫酸镁0.01-0.05％，硫酸亚铁0.0001-0.0003％，PH值调至7.0-7.2。

9.一种枯草芽孢杆菌微生物肥料的应用，其特征在于，在种植甜瓜过程中，使用权利要求2所述的微生物肥料对降低甜瓜枯萎病发病率方面的应用。