[发明专利]一种间充质干细胞冻存液及注射液

说明书

技术领域

本发明涉及一种间充质干细胞冻存液及注射液。

背景技术

干细胞(stem cells,SC)是一类具有自我复制能力(self-renewing)的多潜能细胞，在一定条件下，它可以分化成多种功能细胞。干细胞(Stem Cell)是一种未充分分化，尚不成熟的细胞，具有再生各种组织器官和人体的潜在功能，医学界称为“万用细胞”。

间充质干细胞【mesenchymal stem cells,MSC】是干细胞家族的重要成员，来源于发育早期的中胚层和外胚层。MSC最初在骨髓中发现，因其具有多向分化潜能、造血支持和促进干细胞植入、免疫调控和自我复制等特点而日益受到人们的关注。间充质干细胞在体内或体外特定的诱导条件下，可分化为脂肪、骨、软骨、肌肉、肌腱、韧带、神经、肝、心肌、内皮等多种组织细胞，连续传代培养和冷冻保存后仍具有多向分化潜能，可作为理想的种子细胞用于衰老和病变引起的组织器官损伤修复。

由MSCs制备的干细胞注射液在临床上可以用于预防和治疗异体造血干细胞移植后产生的移植物抗宿主病（GVHD），以及治疗自生免疫性疾病，Ⅰ型糖尿病、如红斑狼疮、风湿性关节炎和硬皮病等。然而，与普通生物制品和药品不同，间充质干细胞注射液的活性物质是细胞，细胞在离体环境中，活性会迅速下降，传统方法用含人血白蛋白的氯化钠注射对MSCs进行保存，在8~24小时以内，细胞活性即大幅下降，无法长期保证细胞活性，给MSCs注射液大量、全国大范围临床应用于提出了严峻的挑战。

大量研究发现，用含有胎牛血清或者细胞培养基的保存液可以解决细胞活性下降快的问题，能够长时间维持细胞活率。但是，细胞接触胎牛血清时会内吞胎牛血清，进而引起细胞某些蛋白表达特性的变化，细胞回输人体后可能引起过敏反应，不能直接用于临床输注；细胞培养基因其成分与人体环境相差较远，未被批准临床使用，也不能直接临床输注，通常被科研机构用来体外培养及冻存细胞。

申请号：201010246409.3，发明名称：一种直接静脉应用的间充质干细胞冻存液的专利申请，公开了一种间充质干细胞冻存液的制备方法，包括如下步骤：1)将人AB血置于无菌离心管中，在1000rpm-1200rpm条件下离心15分钟；2)吸取上清液，转移入新的离心管中，在4000g条件下离心20分钟，上清即为冻存用人AB血浆；3)将二甲基亚砜、上述冻存用人AB血浆、勃脉力A注射液按体积比1∶3∶6混合均匀，即为间充质干细胞冻存液。由该专利申请文件的实施例表1可以看出，该发明的冻存液I和Ⅱ冻存1、2、3个月后复苏，检测细胞活率，冻存液I的细胞活率依次为96%、92.6%和89%，其细胞活率降低率为3.5%/月，冻存液Ⅱ细胞活率依次为97.4%、95%和为94.7%，其细胞活率降低率为1.35%/月，该申请公开的冻存液虽然可以直接静脉输注，但是细胞活率维持时间短。并且，该细胞冻存液中含有人AB血浆，血浆中含有大量未知成分，用于异体输注存在安全隐患，同时，血浆来源也很少，成本高，难以大规模应用。

综上，现有技术中的细胞的冻存液难以兼顾长时间维持细胞活率与临床直接输注。

发明内容

为了解决上述问题，本发明提供了一种新的间充质干细胞冻存液。

本发明间充质干细胞冻存液，它包含如下体积百分比的成分：

优选地，所述冻存液包含如下体积百分比的成分：

进一步优选地，所述冻存液包含如下体积百分比的成分：

它包含如下体积百分比的成分：

进一步优选地，所述冻存液由如下体积百分比的成分组成：

勃脉力A液：每1000ml含氯化钠5.26g、葡萄糖酸钠5.02g、醋酸钠3.68g、氯化钾0.37g、氯化镁0.30g；

20%人血白蛋白：是药典规定的人血白蛋白制品，其中，人血白蛋白的浓度为20%（v/v）。

18AA5%复方氨基酸注射液：由18种氨基酸与山梨醇配制而成的灭菌水溶液。每1000ml含：L-脯氨酸1.00g、L-丝氨酸1.00g、L-丙氨酸2.00g、L-异亮氨酸3.52g、L-亮氨酸4.90g、L-门冬氨酸2.50g、L-酪氨酸0.25g、L-谷氨酸0.75g、L-苯丙氨酸5.33g、L-精氨酸盐酸盐5.00g、L-赖氨酸盐酸盐4.30g、L-缬氨酸3.60g、L-苏氨酸2.50g、L-组氨酸盐酸盐