[发明专利]一种凝胶柱的装填方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种装填凝胶柱的方法，更具体地，本发明涉及一种装填聚合物凝胶高压液相色谱(HPLC)柱的方法。

背景技术

凝胶色谱法又称作分子排阻色谱法，其是上个世纪六十年代初发展起来的一种快速、简单的分离分析技术，主要用于高聚物的相对分子质量分级分析以及相对分子质量分布测试。作为凝胶色谱法的关键部件，有机聚合物凝胶色谱柱的传统装柱方法包括机械装柱法和人工装柱法。机械装柱法是在横流情况下，直接将凝胶浆灌注到柱中，由于没有外压，所以填料难以装填得更紧密，从而导致色谱柱的柱效低、寿命短；人工装柱方法，装柱不稳定，往往不能一次成功，经常需要经常重装，不仅工作量大，而且色谱柱的寿命和柱效也不高。

针对上述问题，本发明的发明人认真地研究了硅胶色谱柱的装填方法，其装填装置如图1所示，通过改进硅胶色谱柱的装填工艺，并在大量实验的基础上完成了本发明。

发明内容

根据本发明的一个方面，提供一种装填凝胶色谱柱的方法，该方法包括如下步骤：

(1)制备匀浆液：将凝胶粉加到去离子水中，充分润湿之后，加热煮沸2～3小时，得到匀浆液；

(2)连接装填系统：将空柱管的上端连接到匀浆罐上，并在空柱管下端连接内径为0.2～0.6mm的不锈钢毛细管；

(3)在空柱管内注入约为空柱管体积1/3的去离子水，然后将所述匀浆液缓慢地加到匀浆罐中；

(4)启动空压机，压入顶替液，并在5.5～8.5MPa的压力下保持20～80分钟，其中该顶替液是水和甲醇的混合物；及

(5)改用去离子水作为顶替液，并以1～3倍柱体积的量冲洗柱床，制得凝胶色谱柱。

在一优选实施方案中，上述步骤(1)中所述的凝胶粉和去离子水的重量比为1∶3～4。

在另一优选实施方案中，上述步骤(1)还包括滤除漂浮于水面的细小颗粒，然后使匀浆液自然沉降的步骤，并且重复该步骤2～4次。

在又一优选实施方案中，上述步骤(4)中所述的水和甲醇的混合物中，水和甲醇的体积比为3∶1～1∶3。

在再一优选实施方案中，前述凝胶粉为交联葡聚糖。

在再一优选实施方案中，该交联葡聚糖的重均分子量为1000～200000。

在再一优选实施方案中，该交联葡聚糖为选自下列中的一种：Sephadex G-10，Sephadex G-15，Sephadex G-25，Sephadex G-50，Sephadex G-75，Sephadex G-100，及Sephadex G-150。

实验表明，根据本发明的方法制得凝胶色谱柱，不仅可以消除填料中的气泡；使有机聚合物填料紧密地填充在柱床上；而且大大地提高了装填工作的一致性。因此，根据本发明的方法获得的色谱柱具有更高的柱效率和更长的使用寿命，同时也使装填色谱柱的成功率由传统方法的76％提高到90％以上。

附图说明

为了更好地理解本发明的构思、特征和优点，下文中将参照附图，更具体地说明本发明。在附图中：

图1是现有的装填硅胶色谱柱的装置的示意图；及

图2是本发明的装填有机聚合物凝胶色谱柱的装置的示意图。

具体实施方式

考虑由于现有的有机聚合物凝胶色谱柱的装填中不施加外压，所以本发明人首先想到用硅胶色谱柱的装填方法装填聚合物凝胶色谱柱。而且，为了对装填的聚合物凝胶施加更大的压力，在本发明的一个实施方案中，本发明人在硅凝胶色谱柱装填装置中的空色谱柱下端的滤板之下加装了一个内径约1～5mm的不锈钢毛细管，限制了溶剂的流出，从而可以增加装填聚合物凝胶时色谱柱中的压力，使得聚合物凝胶可以装填得更紧密，进而提高色谱柱的效率。

在另一实施方案中，本发明人尝试用体系比为3∶1～1∶3的水和甲醇作为顶替液，代替传统方法采用的甲醇或乙醇，结果发现，这样可以使聚合物凝胶装填得更紧密。

在又一实施方案中，发明人一改传统的匀浆液制备方法，而是在将凝胶粉加到去离子水中之后，将其加热煮沸2～3小时。据信，这样不仅可以使凝胶粉溶胀充分，而且可以排除其中的气体，并杀死其中可能存在的细菌和/或微生物，从而使得所制备的色谱柱填料中没有气泡，并延长其使用寿命。