[发明专利]鉴定人MTHFR基因C677T多态性的引物、试剂盒及方法

说明书

技术领域

本申请涉及鉴定人MTHFR基因C677T多态性的引物、试剂盒及方法。

背景技术

MTHFR基因(登录号NM_005957)最常见突变是677C→T的突变，这个突变会影响MTHFR酶的活性。MTHFR酶是同性半胱氨酸(Hcy)代谢过程中的重要酶之一，MTHFR酶活性降低会导致Hcy浓度在体内升高。Hcy是一种血管损伤性氨基酸，其浓度升高可导致血管内皮损伤进而导致动脉粥样硬化的发生。研究发现MTHFR基因C677T的多态性与脑血管病患者的血清Hcy及叶酸含量有确定关系。

发明内容

本申请提供一种能够鉴定MTHFR基因C677T多态性的引物、试剂盒及方法。

本申请提供一种鉴定人MTHFR基因C677T多态性的引物，包括上游引物和下游引物，所述上游引物的序列是SEQ ID NO:1所示的序列和/或SEQ ID NO:2所示的序列，所述下游引物的序列是SEQ ID NO:3所示的序列。

进一步的，所述上游引物的序列是SEQ ID NO:1所示的序列和SEQ ID NO:2所示的序列。

一种鉴定人MTHFR基因C677T多态性的试剂盒，包括第一对引物和第二对引物，所述第一对引物的上游引物的序列如SEQ ID NO:1所示，所述第二对引物的上游引物的序列如SEQ ID NO:2所示，所述第一、二对引物的下游引物的序列均如SEQ ID NO:3所示。

一种鉴定人MTHFR基因C677T多态性的方法，使用所述的引物。

进一步的，对于序列分别如SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:3所示的上、下游引物，其扩增产物的序列如SEQ ID NO:4所示；对于序列分别如SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3所示的上、下游引物，其扩增产物的序列如SEQ ID NO:5所示。

一种鉴定人MTHFR基因C677T多态性的方法，包括如下步骤：

a)获取待测人基因组DNA；

b)分别使用第一对引物和第二对引物，以所述待测人基因组DNA为模板，进行PCR扩增反应，分别获得第一、二扩增产物；其中，所述第一对引物的上游引物的序列如SEQ ID NO:1所示，所述第一对引物的下游引物的序列如SEQID NO:3所示；所述第二对引物的上游引物的序列如SEQ ID NO:2所示，所述第二对引物的下游引物的序列如SEQ ID NO:3所示；

c)分别对所述第一、二扩增产物进行电泳，得到多态性鉴定结果。

进一步的，所述第一扩增产物的序列如SEQ ID NO:4所示，所述第二扩增产物的序列如SEQ ID NO:5所示。

本申请的有益效果是：1)通过设计特定的引物，能够对MTHFR基因677位点是否突变进行鉴定，进而区分出是野生型、杂合型还是突变型。2)PCR扩增后直接电泳，从而简化了鉴定步骤，使操作更加简单，且降低了成本。

附图说明

图1是本发明的电泳结果图。

具体实施方式

下面通过具体实施方式结合附图对本发明作进一步详细说明。

本发明通过ARMS-PCR技术来鉴定患者基因组中MTHFR基因C677T多态性，其在PCR反应后直接进行电泳即可区分出野生型(CC型)、杂合型(CT型)和突变型(TT型)。

根据MTHFR基因序列设计了两对引物，该两对引物均能够用来扩增MTHFR基因677位点附近序列，该两对引物分别定义为第一对引物和第二对引物。

第一对引物的上游引物的序列为：GAAGGTGTCTGCGGGCG(SEQ IDNO:1)，该序列是用来鉴定MTHFR基因677位点为C的序列(即677位点未突变)。

第二对引物的上游引物的序列为：AGAAGGTGTCTGCGGGCG(SEQ IDNO:2)，该序列是用来鉴定MTHFR基因677位点为T的序列(即677位点由C突变为T)。

第一、二对引物的下游引物的序列均为：TGGGAAAGATCCCGGGGACG(SEQ ID NO:3)。

上述各序列中，斜体标记碱基(两个上游引物序列的最后一个碱基)为与待测模板相配对碱基；带下划线碱基为额外错配碱基，目的是进一步增加鉴定的特异性。

本发明鉴定MTHFR基因C677T多态性的方法，包括如下步骤：

1)提取DNA