[发明专利]猪圆环病毒2型Cap蛋白和胸腺素α1融合蛋白及应用

说明书

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体涉及一种猪圆环病毒2型Cap蛋白和胸腺素α1融合蛋白及应用。  

背景技术

猪圆环病毒2型（Porcine Circovirus type 2，PCV2）是断奶仔猪多系统衰竭综合征（Postweaning multsystemic wasting syndrome， PMWS）的病原，引起断奶仔猪发生进行性消瘦、咳嗽、呼吸困难、腹泻、皮肤苍白或者黄染、淋巴结肿大、肾脏灰白水肿等症状。同时该病还会造成一定程度上的的免疫抑制，容易造成其它疾病的继发或并发感染。自1991年加拿大首次发现临床猪圆环病毒以来，该病已给全世界养猪业造成了巨大的经济损失。猪圆环病毒2型ORF2基因编码的Cap蛋白是PCV2的主要结构蛋白，可自我装配成病毒性粒子，并含有可中和病毒的抗原表位，可诱导机体产生较强的抗体反应并获得免疫保护，是设计PCV2新型疫苗的首选目标基因。大肠杆菌表达系统具有生产工艺简单、生产周期短和生产成本低等特点，是基因工程中蛋白类药物开发的首选。但是猪圆环病毒2型ORF2基因5’端存在成串排列的稀有密码子并编码许多碱性氨基酸，不利于其大肠杆菌表达。根据文献报道，猪圆环病毒2型Cap蛋白的羧基端131个氨基酸具有和完整Cap蛋白相同的抗原性，更利于大肠杆菌表达（韩凌霞，陈艳，崔尚金等，猪Ⅱ型圆环病毒全基因组序列分析及其ORF1和ORF2基因的克隆与表达，中国预防兽医学报，2004,26（1）：10-14）。但随着猪圆环病毒2型毒株不断变异，现有疫苗的免疫保护力不断下降。因此，筛选当前流行毒株的Cap蛋白进行疫苗研发无疑具有重要的现实意义和市场开发价值。 

1965年Goldestein等报道，动物胸腺可分离到有生物活性的多胸腺肽类分子，命名为胸腺素（Thymosin)）。1972年Goldestein等报告进一步纯化所得到的主要分子量在1-15KD的组分，称之为胸腺肽组分5 （ThymosinF5），用之于动物研究和临床观察，有补偿胸腺功能低下作用。此后，对胸腺内激素样物质的生物化学研究，在一些实验室陆续开展起来。胸腺素αl其中的一个组分，由28个氨基酸残基组成，其相对分子量为3.108KD，等电点为4.2，无二硫键和糖基化，N端乙酞化，是高度保守的活性胸腺肽。研究表明，胸腺素αl能促进淋巴细胞分化为成熟的有免疫功能的T淋巴细胞，调节和增强机体的细胞免疫功 能，提高机体抗感染能力。在人用临床上，已有超万例胸腺肽产品作为免疫调节剂和增强剂用于治疗原发性或继发性免疫功能缺陷性疾病和肝炎等，其疗效得到国内外相关领域专家的认可。   

虽然胸腺素αl有着广泛的应用前景，但由于其基因过短，很难利用基因工程方法实现直接表达，所以目前多是化学合成产品，价格比较昂贵，另外，由于分子量非常小，所以体内半衰期很短，应用推广受到限制。 

发明内容

本发明涉及一种猪圆环病毒2型Cap蛋白和胸腺素α1融合蛋白及应用，即将筛选的猪圆环病毒2型Cap蛋白与具有免疫增强作用的胸腺素α1蛋白通过Lingker序列连接获得的融合蛋白，并将该融合蛋白作为疫苗用于免疫应答。 

本发明一个方面涉及一种融合蛋白，其氨基酸序列为SEQ ID NO:1。 

本发明的融合蛋白用于制备猪圆环病毒2型亚单位疫苗。 

上述制备的亚单位疫苗，其制备方法如下：将96份融合蛋白与灭菌的4份吐温80搅拌混合作为水相；将94份注射用白油，6份加司本80、2份硬脂酸铝，混合均匀，高压灭菌后作为油相；按水相和油相体积比1:3比例混合乳化即可制备猪圆环病毒2型基因工程亚单位疫苗。 

本发明的亚单位疫苗用于对仔猪的免疫应答。 

本发明将筛选的猪圆环病毒2型Cap蛋白基因与具有免疫增强作用的胸腺素α1基因通过Lingker序列连接获得融合蛋白。一次免疫操作就可以使仔猪可以获得双重免疫保护。本发明的基因工程亚单位疫苗免疫原性良好，可以高效的引起仔猪的免疫应答。 

说明书附图 

图1：本发明的重组表达载体的构建示意图。 

具体实施方式：

本发明涉及一种猪圆环病毒2型Cap蛋白与胸腺素α1组成的融合蛋白。其中猪圆环病毒2型Cap蛋白3′端的131个氨基酸片段和胸腺素α1的28个氨基酸序列通过Lingker序列GSGGG连接起来，其具有序列为SEQ ID NO:1的氨基酸序列和序列为SEQ ID NO:2的核苷酸序列。所述的融合蛋白可通过本领域技术人员所熟知的基因重组的方法进行制备。