[发明专利]一种低血清高效培养鸡毒支原体弱毒株培养基及其制备方法

说明书

技术领域

本发明属于兽医生物学技术领域，涉及一种低血清高效培养鸡毒支原体弱毒株培养基及其制备方法。

背景技术

鸡毒支原体主要引起鸡、火鸡的慢性呼吸道疾病，是一种严重危害养禽生产的病原体，其主要危害是该病在规模化鸡场中经常缓慢流行，导致产蛋鸡产量下降，肉鸡和生长鸡的发育受阻、饲料报酬降低；由于感染鸡群的免疫抑制引起其它疫病的继发或伴发，给养鸡业造成的主要损失是发病鸡群的死淘率明显上升。鸡毒支原体活疫苗和灭活疫苗联合使用可以减少鸡毒支原体水平传播和垂直传播，但优质疫苗的前提需要有一种好的培养基来支撑。

培养基是人工合成各种营养物质供微生物生长的基质。目前培养鸡毒支原体主要应用改良Frey氏或其他支原体培养基。其制苗添加的血清量普遍为10-30%之间。

以上述传统培养鸡毒支原体培养基所需血清量比本发明血清量高5%-25%，过量的血清制备的疫苗无疑给鸡只增加异源体对鸡体的过敏应激反应，最终影响疫苗的免疫效力。

发明内容

本发明所要解决的问题是提供一种低血清高效培养鸡毒支原体弱毒株培养基及其制备方法，用以降低培养鸡毒支原体所需血清用量，提高鸡毒支原体抗原效价。

本发明另一目的是提供该鸡毒支原体弱毒株培养基的制备方法。

本发明所述问题是以下述技术方案解决的：

一种低血清高效培养鸡毒支原体弱毒株培养基及其制备方法，所述低血清高效培养鸡毒支原体弱毒株培养基按如下工艺配制：

基础培养基：

在116℃灭菌30min，待冷却后，在无菌条件下加入下列辅助培养基成分，制成供培养鸡毒支原体培养基。

辅助培养基：

用1mol/L氢氧化钠溶液调整PH至7.6-7.8。

本发明还提供了该鸡毒支原体培养基的制备方法，其特征在于制备步骤如下：

1 制备基础培养基：

取上述（1）-（8）成分逐一溶入1000ml蒸馏水，高压灭菌后备用。

2 制备辅助培养基：

取上述（9）-（14）混和、搅拌，即得辅助培养基。

3 将基础培养基和辅助培养基混和，调pH至7.6-7.8，分装备用。

本发明的低血清高效培养鸡毒支原体弱毒株培养基运用微生物学、无机、有机分析化学的技术原理，对不同的氮源、碳源、蛋白质、无机盐和胆固醇等诸多营养组分的组合进行了筛选，对培养基的pH值、渗透压等进行分析，研究出了适合低血清高效培养鸡毒支原体弱毒株的培养基。该培养基的配方中除基本成份外，在培养基中还添加了新鲜酵母浸出液、谷氨酰胺、精氨酸，上述成分的添加能明显提高鸡毒支原体的活菌滴度；未添加前的活菌滴度为10⁹CCU/ml，添加后活菌滴度为10¹¹CCU/ml。而本发明最大的优势在于猪血清用量仅为5%左右，大大减轻了异源体血清对鸡体的过敏应激反应，为我们的养殖事业保驾护航。

具体实施方式

实施例1

本发明培养基的制备

基础培养基：

在116℃灭菌30min，待冷却后，在无菌条件下加入下列辅助培养基成分，制成供培养鸡毒支原体培养基。

辅助培养基：

将基础培养基（1）-（8）成分逐一溶入500ml蒸馏水中高压灭菌，冷却后添加辅助培养基，1mol/L氢氧化钠溶液调整pH至7.7，制得低血清高效鸡毒支原体培养基。

实施例2

本发明培养基的制备

基础培养基：

在116℃灭菌30min，待冷却后，在无菌条件下加入下列辅助培养基成分，制成供培养鸡毒支原体弱毒株培养基。

辅助培养基：

将基础培养基（1）-（8）成分逐一溶入800ml蒸馏水中高压灭菌，冷却后添加辅助培养基，1mol/L氢氧化钠溶液调整pH至7.7，制得低血清高效鸡毒支原体培养基。

实施例3

应用鸡毒支原体（F36）分别通过本发明支原体培养基、改良Frey氏培养基、支原体培养基对鸡毒支原体（F36）进行比较培养试验：

1 本发明培养基的制备

基础培养基：