[发明专利]一种转化茴香脑生成茴香酸的菌株及其筛选方法和应用

说明书

技术领域

本发明涉及微生物应用领域。具体是一种转化茴香脑生成茴香酸菌株及发酵产回香酸的方法， 

背景技术

茴香脑是茴香油的主要成分，通过深加工可以制取高附加值的茴香醛、茴香酸和茴香醇及其各种衍生物，茴脑等相关化合物广泛应用于食品、化妆品、香料、医药和化工等多种领域。茴香醛和茴香酸广泛用于合成香精香料、电镀金属的光亮剂同时还是合成多种西药的中间体，具有较高的价值。目前茴香醛和茴香酸的生产主要为化学合成法（主要为氧化法），生产率低，副产物多，不仅浪费资源而且污染环境。生物转化法作为一种绿色、环境友好型的生产方法，在转化茴脑合成茴香醛、茴香酸等化合物方面具有良好的发展前景。 

关于茴香脑的代谢，只在近十年才逐渐开展起来的。目前报道能代谢反式茴香脑的微生物菌种有Arthrobacter TA13、Pseudomonas putida JYR-1、黑曲霉ZJ-9和Pseudomonas BT-13。Shimoni E等[从土壤中获得一株能转化反式茴脑的细菌菌株TA13，经16S rDNA序列分析，鉴定为节杆菌Arthrobacter sp.。此外，他们还研究了Arthrobacter TA13及其诱变菌株代谢反式茴脑的途径，根据代谢产物推断了一条茴香脑环氧化后双键断裂的代谢途径，诱变菌株能将异丁子香酚转化生成香草醛和香草酸，以反式茴脑、茴香醇和茴香醛作为碳源可高产茴香酸。Ryu等报道在Pseudomonas putida JYR-1代谢茴香脑的转化液中，检测到了茴香脑环氧化合物、茴香酸及对羟基苯甲酸。国内陈敏开展了微生物降解茴脑的筛选，获得一株茴香醛产率较高的菌株，初步鉴定菌株ZJ-9为真菌黑曲霉，经转化条件的优化，茴香醛的摩尔转化率达4.54%。粟桂娇等以广西盛产的八角茴香油为碳源，开展了生物降解反式茴脑的菌株筛选工作，获得一株细菌菌株BT-13，经形态学、生理生化实验和16S rDNA序列分析，初步鉴定为假单胞菌Pseudomonas sp.。同时考察了假单胞菌BT-13在有机溶剂-水两相系统中的转化，经发酵条件优化，茴香醛的摩尔转化率可达7.7%，利用固定化细胞技术在两相系统中转化，茴香醛的产量有所提高，达12.6%。 

广西盛产天然植物八角，八角和八角茴香油的产量居全国第一，这为我国以天然茴香脑 生产茴香醛提供了充足的原料保证。本发明以广西盛产的八角茴香油为原料，进行微生物转化茴脑生成茴香酸的菌株筛选。 

发明内容

本发明的目的是提供一种转化茴香脑生成茴香酸的菌株。 

本发明的另一个目的是提供上述菌株的筛选方法。 

本发明还有一个目的是利用该菌株生物转化茴香脑生产茴香酸的方法，通过对发酵条件的优化提高茴香酸的产量。 

本发明的目的通过下述技术方案实现：一种转化茴香脑生成茴香酸的菌株，分类命名为伯克霍尔德氏菌（Burkholderia sp）WGB31，保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC NO.M 2012060，保藏日期是2012年3月12日。转化茴香脑生成茴香酸的菌株（Burkholderia spWGB31），简称为WGB31，下述同。 

一种转化茴香脑生成茴香酸的菌株是从广西八角林土壤中筛选得到。 

所述的转化茴香脑生成茴香酸的菌株（Burkholderia spWGB31）的筛选方法，包括如下步骤：从八角林土壤中采用不同浓度的茴脑浓度梯度的富集培养基进行富集，再接种到含有5g/L茴脑的筛选培养基上进行平板筛选，转接到种子培养基中于28℃摇瓶培养12h，再转接至发酵培养基中摇瓶培养，培养温度为28℃，培养时间为48h，采用气相色谱法定量测出茴香酸含量，选出产茴香酸高的菌株。 

所述富集培养基的组分及含量为：葡萄糖20g、蛋白胨10g、K₂HPO₄·3H₂O1g、NaCl 0.5g、MgSO₄·7H₂O 0.5g、FeSO₄0.01g、酵母浸出粉2.5g，蒸馏水定容至1000mL，pH为7.0。 

所述种子培养基的组分及含量为：胰蛋白胨10g、酵母提取物5g、NaCl 10g，蒸馏水定容至1000mL，pH为7.0。