[发明专利]一种青霉素类药物通用半抗原、人工抗原、广谱单克隆抗体及其制备方法与应用

说明书

技术领域

本发明涉及食品安全领域，具体涉及一种青霉素类药物的通用半抗原、人工抗原和广谱单克隆抗体及其制备方法与应用。 

背景技术

青霉素类药物是一类能破坏细菌细胞壁并在细菌繁殖期起杀菌作用的抗生素，主要包括苄青霉素、甲氧西林、羧苄西林、氨苄西林、阿莫西林、苯唑西林、氯唑西林、双氯西林等。此类药物主要对革兰氏阳性菌有效，对革兰阳性球菌及革兰阳性杆菌、螺旋体、梭状芽孢杆菌、放线菌以及部分拟杆菌也有抗菌作用。因此，青霉素类药物在畜牧养殖业中被大量用于治疗动物的多种细菌性疾病。 

但青霉素类药物对畜禽有一定的毒性，动物大剂量或长期连续服用青霉素类药物易引起毒性反应，引起动物抽搐、大小便失禁、甚至瘫痪等。更重要的是，青霉素类药物大量使用会在动物性食品中造成残留而被消费者食入，这对人类身体健康有巨大危害。因此，世界各国都对动物性食品中残留的青霉素类药物进行严格的监控，并且规定了多种青霉素类药物在不同动物性食品中的最高残留限量，如中国农业部规定几种青霉素类药物在牛奶中的最高残留限量为：青霉素，4ng/mL；阿莫西林，10ng/mL；氨苄西林，10ng/mL。 

目前，国内外己发表的有关青霉素类药物残留检测的方法有高效液相色谱法(HPLC)、液相色谱一质谱法(LC-MS)、液相色谱-串联质谱法(LC-MS/MS)。这些常用方法实际操作中需要有昂贵的仪器，且前处理复杂、繁琐、操作时间长、操作技术要求高。 

免疫分析方法有很高的精确度、灵敏性和特异性，且对技术要求不高，具有检测时间短，适用于大批量测定等优点。免疫分析法的核心试剂是抗体。目前已有的针对青霉素类药物的免疫分析报道中，均是以某一种青霉素类药物为基础去制备抗体，所得抗体只对该药物有较高识别能力，而对其他青霉素类药物识别能力低，也就是说不能识别所有青霉素类药物。 

因此，提供一种广谱适用的青霉素类药物免疫分析用抗体就成为该技术领域急需解决的技术难题。 

发明内容

本发明的目的之一是提供一种青霉素类药物的通用半抗原。 

本发明的上述发明目的是通过以下技术方案达到的： 

一种青霉素类药物的通用半抗原，其分子结构式如式I所示： 

式I。 

本发明的目的之二是上述青霉素类药物通用半抗原的制备方法。 

本发明的上述发明目的是通过以下技术方案达到的： 

一种青霉素类药物通用半抗原的制备方法，包括如下步骤： 

(a)将6-氨基青霉素酸的二氧六环溶液与对羟基苯甲醛的二氧六环溶液混合后，加热回流； 

(b)反应完全后，冷却，抽滤，水洗得到式I结构的化合物。 

所用6-氨基青霉烷酸和对羟基苯甲醛的摩尔比为1∶1～2，优选1∶1。 

本发明的目的之三是提供一种青霉素类药物的通用人工抗原。 

本发明的上述发明目的是通过以下技术方案达到的： 

一种青霉素类药物的通用人工抗原，其分子结构式如式II所示： 

式II。 

一种优选技术方案，其特征在于：所述的载体蛋白为卵清蛋白或牛血清白蛋白。 

本发明的目的之四是提供一种青霉素类药物通用人工抗原的制备方法。 

本发明的上述发明目的是通过以下技术方案达到的： 

一种青霉素类药物通用人工抗原的制备方法，包括如下步骤： 

(a)将N，N-羟基二咪唑和式I结构化合物溶于无水丙酮，将该溶液在37℃振荡培养箱中反应2小时，反应后使丙酮挥发，得到中间产物，将该中间产物溶解于磷酸盐缓冲溶液中，得到溶液A； 

(b)将所述载体蛋白溶解于磷酸盐缓冲溶液中，得到溶液B； 

(c)将所述溶液B滴加至所述溶液A中，得到式II结构的人工抗原。 

一种优选技术方案，其特征在于还包括如下步骤： 

(d)将由步骤(c)得到的人工抗原在4～20℃用磷酸盐缓冲溶液透析48～84小时，优选在4℃透析72小时。 

将透析后的青霉素类药物通用人工抗原进行离心，所述离心过程中，转速为6000转/分钟，时间为10分钟。 

本发明的目的之五是提供一种上述青霉素类药物通用人工抗原制备的广谱单克隆抗体。 

本发明的上述发明目的是通过以下技术方案达到的： 

一种青霉素类药物通用人工抗原产生的广谱单克隆抗体，是能与所述青霉素类药物通用人工抗原发生特异性免疫反应的免疫球蛋白。