[发明专利]一株海洋真菌分枝孢子菌属真菌球孢枝孢及其应用

说明书

（一）技术领域

本发明涉及一株具有抗肿瘤活性的海洋真菌——分枝孢子菌属真菌球孢枝孢菌（Cladosporium sphaerospermum）100102A及其应用。 

（二）背景技术

癌症一直都是人类难以攻克的一个难题，寻找生理活性强的物质成为人类攻克疾病的主要工作之一。海洋微生物代谢产物研究是近年来国际上新兴的研究课题。 

由于对陆生动植物的药源发现越来越稀少，海洋已成为人类开垦新药的处女地。海洋约占地球总面积71%，蕴藏着极其丰富的生物资源，是有机物质的最大生产者。在各种天然生物活性分子的来源中，海洋微生物是最有潜能的。不像陆生植物，海洋微生物能够产生卤代次生代谢产物。自1928年青霉素的首次发现使之在细菌感染的治疗中有一很大突破，真菌便成为治疗疾病的药物的重要来源之一。随之在1971年分离得到的环孢霉素推动了其在免疫药理学方面的进一步发展。海洋真菌的代谢产物不仅对于药物的开发必不可少，同时它在植物保护方面也非常重要，使海洋真菌的研究前景更加广泛。目前研究较多的抗肿瘤、抑制乙酰胆碱酯酶、抗细菌和抗氧化等海洋真菌次级代谢产物已成为具有生物医学意义的天然化合物丰富来源，均具有广阔的药用前景。故从海洋真菌的次级代谢产物中发现高活性的物质对于发现先导化合物非常的重要，对疾病的攻克也具有着重要的意义。 

（三）发明内容

本发明目的是一株具有抗肿瘤活性的海洋真菌——分枝孢子菌属真菌球孢枝孢菌（Cladosporium sphaerospermum）100102A，及其在制备抗肿瘤药物中的应用。 

本发明采用的技术方案是： 

一株具有抗肿瘤活性的海洋真菌——球孢枝孢菌（Cladosporium sphaerospermum）100102A，保藏于中国典型培养物保藏中心，地址：中国，武汉，武汉大学，邮编430072，保藏编号：CCTCC No：M 2012290，保藏日期：2012年7月18日。 

所述球孢枝孢菌（Cladosporium sphaerospermum）100102A的菌落特征如下：涂布或划线接种于平板培养基上生长迅速，28℃培养48 h后长出圆形、墨绿色、直径约0.3~0.5 cm的菌落；该菌株菌体生长特征如下：在液体培养基中，28℃培养48 h后呈颗粒状贴壁生长；该菌株生理生化特性如下：革兰氏染色阳性。 

本发明所述球孢枝孢菌（Cladosporium sphaerospermum）100102A由浙江省东海海域采集的海水中分离和筛选得到的菌株。 

菌株的筛选纯化方法为：将采集的海水运用稀释涂布法涂于土豆平板培养基上，28℃培养至菌落数量不再增加，挑取单菌落至斜面培养基上。28℃培养2d，以菌株形态特征区别进行挑选，即得该菌株，并对该菌株进行菌种鉴定。 

所述的平板培养基和斜面培养基的组成相同，组成为：土豆150~350g/L，葡萄糖10~30g/L，琼脂15~35g/L，溶剂为水，pH7.2~8.0。本发明经筛选获得的球孢枝孢菌（Cladosporium sphaerospermum）100102A，涂布或划线接种在平板培养基上生长迅速，28℃培养48 h后长 出圆形、墨绿色、直径约0.1~0.3 cm的菌落。 

将所述的球孢枝孢菌（Cladosporium sphaerospermum）100102A的16sRNA部分核苷酸序列与美国国立生物信息中心（National Center for Biotechnology Information USA，NCBI）的基因库中的微生物16sRNA序列比对，将其命名球孢枝孢菌（Cladosporium sphaerospermum）100102A。该菌株的16s rRNA的部分核苷酸序列如下：