[发明专利]BMP2/7缓释系统在脑胶质瘤治疗上的应用

权利要求书

1.一种BMP2/7缓释系统在脑胶质瘤治疗上的应用。

2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于：BMP2/7的载体采用肝素化胶原蛋白；所述的肝素化胶原蛋白的制作步骤：

步骤1：胶原蛋白的交联，取冻干胶原片称重，记录胶原片的质量，配置0.05M的2-甲基吗啡磺酸(MES)100ml(PH5.0)；室温下，将胶原片浸泡于上述溶质与酒精的混合物中(酒精体积为40％)，再向溶液中加入N，N-环己基碳化二亚胺(EDC)和N-羟基丁二酰亚胺(NHS)，按质量比为每克胶原蛋白1.731克EDC和0.415克NHS，浸泡4小时；

步骤2：胶原蛋白的肝素化，交联的胶原蛋白PH5.0的MES缓冲液中浸泡30分钟以上，按1∶0.6配制EDC/NHS溶液，将肝素溶于0.05M的MES缓冲液(PH5.0)中，肝素浓度为2％(w/v)，按一定比例加入EDC/NHS溶液；10min后，按每克胶原蛋白188.3ml的比例加入EDC/NHS活化的肝素溶液，孵育2小时后，分别用0.1M的Na2HPO4，4M NaCl与无菌蒸馏水漂洗。

3.根据权利要求1所述的应用，其特征在于：BMP2/7采用异源二聚体类似物。

4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于：采用柔性连接技术表达BMP2/7异源二聚体类似物；柔性连接技术参考本发明人的专利“一种BMP2/7异源二聚体结构类似物及其表达方法与应用”，专利200610034620.2。

5.根据权利要求2和权利要求4的应用，其特征在于：BMP2/7异源二聚体与肝素化胶原蛋白结合制成BMP2/7缓释系统，结合步骤如下：

将直径10mm的肝素化胶原膜浸泡于5ml PBS溶液中过夜，晾干后滴入0.25ml的BMP2/7PBS溶液，室温静置90min后，PBS漂洗3次。

6.根据权利要求5的应用，其特征在于：通过构建大鼠颅内荷瘤模型，进行BMP2/7缓释载体与化疗药物的协同作用、BMP2/7缓释载体的分布动力学特征、BMP2/7缓释载体的生物相容性研究。

7.根据权利要求6的应用，其特征在于：在瘤体内注射BMP2/7缓释载体，能够明显抑制肿瘤的增殖，起到明显的治疗效果；BMP2/7缓释载体能够协同化疗药物抑制肿瘤的生长；缓释系统不但提高了靶区脑组织的药物浓度，同时降低了非靶区组织的浓度，避免药物的毒副作用；所有大鼠均未发生明显行为改变和神经功能缺陷，未出现全身或者局部毒性反应，表明BMP2/7缓释载体的生物相容性良好。

8.根据权利要求5的应用，其特征在于：通过构建裸鼠颅内移植瘤模型，BMP2/7缓释系统单独作用能部分抑制肿瘤组织的形成，肿瘤组织对化疗药物不够敏感，而两者却又明显的协同作用，充分证明BMP2/7治疗脑胶质瘤的潜在价值。

9.根据权利要求5的应用，其特征在于：通过构建裸鼠皮下移植U251胶质瘤模型，BMP2/7能够协同化疗药物显著抑制裸鼠皮下瘤的生长。

10.根据权利要求7、权利要求8、权利要求9的应用，其特征在于：采用复合BMP2/7的缓释载体，在脑胶质瘤的局部可以形成高浓度的给药环境并能缓慢释放BMP2/7，抑制脑胶质瘤的增殖，促进其分化，如果配合传统的治疗手段如放疗或化疗，能够在不同的水平不同的途径发挥作用，增加了消除脑胶质瘤细胞的可能性。