[发明专利]一种基因C型鸭甲型肝炎病毒定性和定量检测方法

说明书

技术领域

本发明涉及家禽传染病诊断，具体涉及基因C型鸭甲型肝炎病毒荧光定量RT-PCR方法技术领域。

背景技术

近年来，由基因C型鸭甲型肝炎病毒(DHAV-C)引起的鸭病毒性肝炎广泛流行于韩国和中国，该病毒主要侵害3周龄内雏鸭，发病急，病死率高，严重影响养鸭业的发展。DHAV-C引起的鸭病毒性肝炎与基因A型鸭甲型肝炎病毒(DHAV-A)引起的鸭肝炎在流行病学、临床症状和病理变化等非常相似，只有借助实验室诊断才能鉴别，病毒分离鉴定是传染病病原学诊断的经典方法，但该方法至少需要1～2周才能确诊，费时费力，不能满临床实践中对传染病及早诊断、迅速采取有效措施进行防治的的需求。RT-PCR作为一种常规的分子生物学技术以其快速、灵敏、特异、操作简单等优点广泛用于人类和多种动物病毒病的诊断([1]Pritchard L I，Morrissy C，Van Phuc K，et al.Development of a polymerase chain reaction to detect Vietnamese isolates of duck virus enteritis.[J].Vet Microbiol，1999，68(1-2)：149-156.[2]Keramas G，Bang D D，Lund M，et al.Use of culture，PCR analysis，and DNA microarrays for detection of Campylobacter jejuni and Campylobacter coli from chicken feces.[J].J Clin Microbiol，2004，42(9)：3985-3991.[3]Lund M，Nordentoft S，Pedersen K，et al.Detection of 

Campylobacter spp.in chicken fecal samples by real-time PCR.[J].J Clin Microbiol，2004，42(11)：5125-5132.[4]Identifcation of duck plague virus by polymerase chain reaction.[J].1999，43(1)：106-115.)。目前已有RT-PCR用于DHAV-C鸭肝炎的诊断韩国学者Kim等(Kim MC，Kwon YK，Joh SJ，et al.Differential diagnosis between type-specifc duck hepatitis virus type 1(DHV-1)and recent Korean DHV-1-like isolates using a multiplex polymerase chain reaction.[J].Avian Pathology，2008,37(2)：171-177.)分别针对DHAV-A基因组的DRL-62基因和DHAV-C基因组的AP-04203基因设计了两对引物(AP1：

5’-GTTCCAAATGATGATTATTATG-3’；AP2：