[发明专利]一种利用金色链霉菌的冷冻摇瓶菌丝替代孢子接种的方法

权利要求书

1.一种利用金色链霉菌的冷冻摇瓶菌丝替代孢子接种的方法，包括：(1)孢子培养；(2)摇瓶菌丝；(3)种子培养；(4)深层液体通气发酵，其中深层液体通气发酵的条件如下：①发酵培养基组成：花生饼粉或黄豆饼粉：3.0％-5.0％；玉米淀粉：8.0％-12.0％；氯化钠：0.2％-0.3％；硫酸铵：0.4％-0.6％；碳酸钙：0.5％-0.8％；酵母粉：0.1％-1.6％；硫酸镁：0.02％-0.03％；磷酸二氢钾：0％-0.03％；淀粉酶：0.003％-0.02％；②培养温度：接种后培养温度控制在28-34℃，菌丝成熟后降温至29±3℃培养；③发酵周期为90-124小时；④发酵培养基消后pH控制在5.6-6.5；⑤发酵培养过程中为固定转速，控制在120-140rpm；⑥溶氧大于30％。

2.根据权利要求1所述的一种利用金色链霉菌的冷冻摇瓶菌丝替代孢子接种的方法，其特征在于：从母瓶上挑取孢子丰满、无白点的单菌落4-10只于约1-10ml无菌水中，搅匀，用玻璃铲挑取孢子液，接入子瓶斜面培养基上；要求菌落分布均匀，密布整个培养基表面；接好的斜面标识后，置于温度32±1℃、湿度40-65％的恒温室内培养3-5天，成熟后置于0-10℃冰箱保藏备用。

3.根据权利要求1所述的一种利用金色链霉菌的冷冻摇瓶菌丝替代孢子接种的方法，其特征在于：摇瓶种子培养成熟后，在无菌条件下，将种子液合并为150mL/瓶的接种瓶内，可直接用于种子罐培养，也可将合瓶后的种子液于-20℃冰箱内冷冻保藏，保藏期限≤45天。

4.根据权利要求1所述的一种利用金色链霉菌的冷冻摇瓶菌丝替代孢子接种的方法，其特征在于：将保藏的摇瓶菌丝室温下解冻，接入种子罐内培养；种子罐培养温度控制在26-33℃，罐压控制在0.04-0.06Mpa条件下进行培养，从消后到培养过程中，取样做无试检查与生化参数(pH值、总糖、氨基氮、效价等)检验，培养时间19-25小时，二级种子液培养时间4-8小时，种子生长良好可移入发酵罐。