[发明专利]一种筛选金霉素产生菌的新方法

说明书

技术领域

本发明属于抗生素发酵领域，涉及一种指示金霉素产生菌发酵液中金霉素含量高低的方法，特别是涉及一种通过简单操作快速比较不同金霉素产生菌发酵液中金霉素含量相对高低的方法。 

背景技术

金霉素(Chlortetracycline)，又称氯四环素，属四环素类中衍生物的一种。化学名：6-甲基-4-二甲氨基-3，6，10，12，12a-五羟基-1，11-二氧代-7-氯-1，4，4a，5，5a，6，11，12a-八氢-2-并四苯甲酰胺。分子量：478.8；分子式：C₂₂H₂₃ClN₂O₈。金霉素抗菌谱广，对阳性菌、阴性菌、螺旋体、立克次氏体、支原体、衣原体、某些原虫等均可产生抑制作用。金霉素的抗菌作用主要在于抑制细菌的生长，在其较高浓度时具有杀菌作用，其作用机制是干扰蛋白质的合成。适用于鸡白痢、伤寒、猪细菌性肠炎以及禽类副伤寒、霍乱等疾病。同时，作为理想的饲料添加剂它还具有预防潜在感染、改善消化代谢、抑制肠道内有害微生物，促进有益微生物生长、提高饲料效能等。在全球范围内，金霉素是所有饲料药物添加剂中使用量最大的品种，是国际上重要的兽用抗生素之一。 

菌种是发酵的根本。每一发酵产品的生产水平跨越式提高都与菌种技术进步密不可分。为了提高金霉素发酵的工业生产水平，对金霉素工业产生菌进行选育，以期获得高产、遗传稳定的菌株，始终是金霉素研究工作中的一个热点。而菌种筛选技术是获得高产菌株的关键。要想得到优良的工业生产菌株，无法绕开大量烦琐的菌株筛选工作。从当前生物技术产业来看，高产的工业生产菌种的获得还是离不开包括自然选育、诱变育种和以原生质体融合为代表的杂交育种技术，筛选工作量大，费时费力。这是因为产量性状受多基因决定，一次诱变和筛选很难有大幅度提高，需要多轮诱变筛选才能获得稳定、高产的单菌落培养物(菌株)，每轮都有一个大量筛选过程，这一点不同于以发现化合物为目标的菌种筛选。因此，随机筛选的盲目性特点就对筛选量提出了很高的要求。高通量菌种筛选是获得高效菌种的必要手段。 

在传统的金霉素产生菌的筛选中，为评价不同菌种产抗能力的高低，必须对不同菌种的发酵液效价进行测定，一般采用化学测定法。即利用金霉素在酸性溶液中经加热后能脱去一分子水，生成黄色的脱水金霉素，其色度与含量呈正比。此性质符合郎伯一比耳定律，故可利用比色法来测定其效价。具体做法为金霉素发酵液经草酸酸化过滤后，吸1mL滤液于9mL蒸馏水中，分别吸取1mL稀释滤液于2只50mL装有5mL的2mol/L盐酸的容量瓶中，一只用作对照，另一只于沸水中煮沸5分钟，冷却后加水定容至刻度，摇匀后用分光光度仪(波长440nm)测定。这种方法工作量大，效率较低，实验过程难以达到高通量筛选的要求。 

发明内容

为了解决上面提到的金霉素发酵液的金霉素含量检测中遇到的传统化学法工作量大、效率低下的问题，本发明提供了一种有针对性的新型检测方法，可以降低高通量菌种筛选过程中金霉素发酵液效价检测的工作量，同时保证筛选结果的准确度，以较低的工作量达到同样的工作目的。 

本发明的目的通过以下技术手段实现： 

在金霉素生产菌的菌种选育过程中，在菌株进行摇瓶发酵培养后的产抗生素能力比较时，不直接测定其化学效价，而是预先制备直径3mm的圆形滤纸片，蘸取发酵液的稀释液，在管壁上沥干，在预先制备的金黄色葡萄球菌双碟上均匀放置，每皿可放4-6片，倒置培养。培养后可形成可见抑菌圈，然后使用专门的微生物自动测量分析仪测量不同菌株产生的抑菌圈的大小值，以该值大小作为判断各个菌株产抗能力高低的依据。 

本发明的优点和有益效果为： 

1.这一措施的优点在于不必经过繁杂的处理过程，大为提高工作效率。 

2.这一发明在应用于高通量初筛时，不必测定准确的发酵液效价值，从抑菌圈的直径大小来判定产抗水平的高低，直观、便捷、有效。 

附图说明

附图是用来提供对本发明的进一步理解，并且构成说明书的一部分，与下面的具体实施方式一起用于解释本发明，但并不构成对本发明的限制。在附图中： 

图1是本发明的筛选金霉素产生菌的一种实施方式的示意图。 

具体实施方式

本发明的目的是提供一种筛选金霉素产生菌的新方法，通过判断金霉素产生菌的发酵液中金霉素含量高低来筛选菌种，具体包含以下步骤： 

(1)完成培养的摇瓶发酵液加入适量草酸，放到摇瓶机上振荡酸化至pH在1.5-1.8之间。