[发明专利]一种以脐带沃顿胶为材料制作新型生物软骨支架

权利要求书

1.一种以脐带沃顿胶制作新型生物软骨支架的方法，其特征在于，该方法包括以下步骤：

对脐带标本进行处理制作出新型生物软骨支架；

支架材料经石蜡包埋切片后，行HE染色，光镜下观察材料的孔性结构；

取制备的三维多孔支架切成约50um薄片，于表面喷铂金处理后，扫描电镜下观察，选择合适倍数拍摄扫描照片，观察复合支架材料的形貌；

通过对人脐带沃顿胶结合物理和化学两种方法进行脱细胞处理，再经冷冻干燥成型后成功地制备了三维多孔海绵样支架，去细胞彻底，且不破坏胶原结构。

2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，对脐带标本进行处理制作出新型生物软骨支架的流程包括以下步骤：

(1)将脐带取下后，磷酸盐缓冲液反复冲洗，冲净脐带表面及脐血管中的脐血，手术剪将脐血管及脐带外膜小心分离后去除，分离出沃顿胶，将脐带沃顿胶剪成长约2cm小段备用；

(2)再次用合青、链霉素PBS液冲洗沃顿胶，5分钟×3次；

(3)三蒸水浸泡沃顿胶；

(4)胰酶37℃消化30分钟，反复震荡；

(5)三蒸水反复震荡漂洗；

(6)将漂洗后的沃顿胶装入冻存管中，置入含-196℃液氮的液氮罐中冷冻15分钟，取出37℃水浴快速复温解冻，重复3次；

(7)再次予PBS液清洗数次；

(8)三蒸水浸泡5小时，并震荡数次；

(9)低温冰箱，-80℃预冻1小时成型；

(10)真空冷冻干燥机中真空冷冻干燥16小时；

(11)将经过冷冻干燥处理后制备出的支架分装在双层塑料袋中；

(12)使用环氧乙烷灭菌12小时；

(13)放置于4℃冰箱中密封条件下保存备用。

3.如权利要求1所述的方法，其特征在于，支架呈三维多孔网状结构，孔隙分布较均匀，材料内空隙相互连通，适合作为软骨组织工程的支架载体。