[发明专利]鲫鱼卵中丝氨酸蛋白酶抑制剂及其基因和应用

说明书

技术领域：

本发明涉及鲫鱼卵中丝氨酸蛋白酶抑制剂及其基因和应用，属于生物医学技术领域。 

背景技术：

丝氨酸蛋白酶抑制剂(serine protease inhibitor)泛指具有抑制丝氨酸蛋白酶活性作用的一类物质，广泛存在于动物、植物、微生物体中。在动物体中，丝氨酸蛋白酶抑制剂是维持体内环境稳定的重要因素，一旦平衡失调即导致多种疾病，任何影响其活性的因素也会造成严重的病理性疾病。它们最基本的功能是防止不必要的蛋白水解，调节丝氨酸蛋白酶的水解平衡。作为调控物，丝氨酸蛋白酶抑制剂在机体的生理活动中扮演着重要的角色，如激活酶原、释放激素的前体物、参与机体免疫反应、血液凝固、补体形成、蛋白质折叠、细胞迁移、细胞分化、细胞基质重建、血压调节、肿瘤抑制以及病毒或寄生虫致病性的形成等。鉴于其重要的生理功能，丝氨酸蛋白酶抑制剂一直倍受研究者的关注，目前已分离得到多种天然的丝氨酸蛋白酶抑制剂，同时如何将其更好地应用于人类也已成为国际研究的热点。而其研究与开发则蕴含着巨大的临床治疗药物制备价值。 

人类免疫缺陷病毒(Human Immunodeficiency Virus，HIV)，顾名思义它会造成人类免疫系统的缺陷。1981年，人类免疫缺陷病毒在美国首次发现。它是一种感染人类免疫系统细胞的慢病毒(Lentivirus)，属反转录病毒的一种。至今无有效疗法的致命性传染病。该病毒破坏人体的免疫能力，导致免疫系统的失去抵抗力，而导致各种疾病及癌症得以在人体内生存，发展到最后，导致艾滋病，自1988年Kohl等的实验证明：HIV蛋白酶是HIV感染和复制的必需酶，可以作为抗AIDS药物的靶点以来，人们已合成和筛选到近百种有抗病毒活性的化合物。通过与逆转录酶抑制剂的联合治疗来减少HIV阳性患者体内携带的病毒；然而，即使在单一治疗中仍具有很强的效力。HIV蛋白酶在Phe-Pro，Phe-Leu，Phe-Thr的特异性剪切，使得抑制剂的设计必须具备高度可变性。目前，有8类蛋白酶抑制剂用于HIV治疗，包括替拉那韦，印地那韦，沙奎那韦，洛匹那韦。新 一代的抑制剂正在被开发以发挥最大的疗效，来治疗病患。目前治疗HIV的第二代蛋白酶抑制剂TMC-114已进入临床III阶段测试中。 

据国内外文献报道，丝氨酸蛋白酶抑制剂如aprotinin除已在临床上广泛用于胃炎、胰腺炎等疾病的治疗外，也在胸外科手术中用于抗纤溶，抑制接触性激活、抗炎症等。丝氨酸蛋白酶类似物如Kallikrein，tryptase在风湿性关节炎以及许多炎症中(如鼻炎、结膜炎、哮喘、胃肠炎、心血管系统炎症)发生中起着重要的作用。临床试验证明其抑制剂是有效地治疗药物。另一方面。目前临床上还没有有效地治疗疱疹病毒感染的药物，近年来发现，抑制疱疹病毒丝氨酸蛋白酶是有效的治疗手段。 

鲫鱼鱼卵作为一种丰富的水产资源，其综合利用潜力有待进一步开发，以提高其附加值。研究表明，鱼卵中存在多种蛋白酶抑制剂成分，在鱼卵中除执行生理调节功能外，在病原生物防御中也起到了重要作用。然而，截止目前为止只对少数鱼卵中的蛋白酶抑制剂进行了研究，且大多集中于半胱氨酸蛋白酶抑制剂的研究。因此，对其进行研究显得极为必要，既可以进一步揭示鱼类的自身防御机制，探讨其在鱼卵中生理、防御功能，又可为其在食品医药等领域的应用提供基础数据。 

发明人降本发明的鲫鱼卵中丝氨酸蛋白酶抑制剂全序列氨基酸结构经蛋白质数据进行搜寻比较，未发现有任何相同多肽。发明人将本发明的鲫鱼卵中丝氨酸蛋白酶抑制剂编码基因经基因数据库进行搜寻比较，未发现任何相同基因。 

发明内容：

本发明的目的是基于上述现有技术基础，提供一种具有强烈的丝氨酸蛋白酶抑制剂活性，同时具有较强的肿瘤细胞生长抑制活性和免疫调节活性的鲫鱼卵丝氨酸蛋白酶抑制其基因和在制药中的应用。 

为实现本发明的目的，本发明提供了如下技术方案： 

鲫鱼卵丝氨酸蛋白酶抑制剂成熟蛋白质序列：