[发明专利]猪AMY2基因的一个可用于溯源的SNP分子标记及其检测方法

说明书

技术领域

本发明属食品安全领域，涉及猪AMY2基因的一个可用于溯源的SNP分子标记及其检测方法。

背景技术

猪肉制品作为人膳食中重要的蛋白质来源，如何确保其安全卫生，保障消费者的身体健康和生命安全已成为全球性的热点问题。世界各国政府纷纷采取一系列的技术措施来强化对肉产品的安全管理，以期最大程度上减少食品安全事件的发生。我国各大城市也纷纷建立了肉产品的追溯系统，通过肉制品的溯源管理，能够为消费者提供准确而详细的有关产品的信息，有利于生产经营者及时发现各环节中存在的不安全隐患，为消费者提供一个获取有效可靠信息的途径。更为重要的是，大大加强了政府部门对肉质品质量安全的监管，为国家迅速建立食品安全风险的应对机制提供有效信息，将有助于社会的安定。

但是我国肉产品追溯系统所采用的标签技术存在标签丢失、记录出差、标记图案模糊不清以及标签容易人为改换等缺点；而国外发达国家所采用的DNA溯源技术是基于个体DNA指纹图谱的生物学技术，有着绝对的不可更改性和唯一性，不受人为因素影响。而且因为DNA溯源技术容易分型、重复性好、检测手段简单快捷、成本低廉等成为目前国际上被公认为最具发展潜力和应用价值的快速溯源技术。

DNA溯源技术的产生源于DNA的遗传与变异，用于构建个体DNA指纹图谱的分子标记有AFLP标记（扩增片段长度多态性）、SSR标记（微卫星标记）和SNP标记（单核苷酸多态性）。

AFLP具有的高度可靠性和操作简便性，但是AFLP存在着对模板反应表现迟钝、谱带可能发生错配与缺失、成本相对比较高等缺点。相比SNP标记，微卫星标记的等位基因众多，多态丰富，但也正因如此，使得SSR标记的带型复杂，给DNA指纹识别自动化和规模化带来困难。SNP标记是第三代分子遗传标记，是指基因组同一位点上单个核苷酸的变异，一般表现为二等位基因，非常适宜高通量自动化分析，所以日益成为动物身份识别最受关注的分子标记。

但是用于肉产品溯源的SNP标记不同于一般的SNP标记，对于单个的SNP标记，它必须至少具有以下特征：（1）变异度高，在品种或品系中等位基因频率接近；（2）品种间等位基因分布频率差异小；（3）杂合度大于等于0.3。

在长期的育种工作中，研究者积累了大量的SNP标记，但是这些SNP标记往往集中分布在某些染色体上，如1号染色体，12号染色体等，而另外部分染色体，如4号，8号，14号，18号染色体等则缺乏SNP标记，因此为了满足对猪肉产品进行DNA溯源的要求,我们进行新SNP标记的研究工作。

猪AMY2（amylase，alpha 2B）基因称为胰腺淀粉酶基因，位于猪的第4号染色体上。AMY2基因在人类，羊和鸡中已有研究，该基因跟代谢途径存在关联。

发明内容

本发明所要解决的技术问题在于提供猪AMY2基因的一个可用于溯源的SNP分子标记及其检测方法，该SNP分子标记在商品猪培育中，可以广泛用于猪肉产品DNA溯源及其检测，特别是用于猪肉产品的安全性溯源。

为实现上述目的，本发明采用以下技术方案。

所述的猪AMY2基因的一个可用于溯源的SNP分子标记，共1060bp，包含部分第五外显子，部分第七外显子和完整的第五内含子，第六外显子和第六内含子序列，且第104位碱基处有一个碱基突变104C→104T，其DNA序列具体如SEQ ID NO 1所示。

所述的SNP分子标记编码的氨基酸序列如SEQ ID NO 2所示。

所述的SNP分子标记是通过DNA池（pool）测序获得，并在包括10个猪品种或品系的试验群体（共计235个个体）中，分析该SNP分子标记在试验群体中等位基因的分布情况，发现该分子标记在不同的品种和品系中的等位基因频率接近，多态性丰富，品种或品系间等位基因频率分布差异小，初步判定该SNP标记可用作猪肉产品DNA溯源。

所述的猪AMY2基因的一个可用于溯源的SNP分子标记的检测方法，采用PCR-Eco91I-RFLP方法进行，包括以下步骤：

（1）构建猪的DNA池（pool）；

（2）设计正、反向引物分离AMY2基因的DNA片段，测序并分析；

（3）PCR-Eco91I-RFLP检测方法的建立及突变位点的检测；

（4）采集10个品种和品系的耳组织样，共计235个个体；

（5）检测SNP分子标记在试验群体的分布，统计分析，并进一步试验验证是否适用于猪肉产品溯源。