[发明专利]快速无损伤性检测肝肿瘤标志物的方法以及采用的试纸条

说明书

技术领域

本发明涉及一种检测肝肿瘤标志物的方法及其采用的检测工具。

背景技术

原发性肝癌，尤其是肝细胞癌（Hepatocellular carcinoma,HCC）长时间居于世界最重要的癌症之一。其患病率在我国呈逐年上升趋势，该病手术切除率低，5年生存率不到5%，现居我国癌症死因的第2位。肝癌通常进展缓慢，在早期阶段无症状。目前，结合血清甲胎蛋白（AFP）检测和肝脏的超声检查是监测和筛查肝癌的标准方法。然而，这些方法的敏感性和特异性有限。许多研究表明，AFP检测的敏感性较低（仅50~60%）且其诊断准确性不能令人满意。而肝脏的超声检测则对操作者依赖较高且当肿瘤直径小于2cm时假阴性率较高。

蛋白质糖基化是一种重要的翻译后修饰，在许多细胞过程如蛋白构象、折叠、转运与稳定中都起着重要作用。与此同时，细胞生长、分化，细胞-细胞间信号传递、免疫应答，病原微生物的发病机制及许多其他生物学过程也受糖基化的影响。更重要的是，现有研究已确定，在多种疾病中糖蛋白的糖基化发生了异常改变，可作为疾病诊断及预后的生物标志物。

高尔基体蛋白73（Golgi Protein73，GP73）是存在于高尔基体主要在上皮细胞表达的一种跨膜蛋白。在正常肝脏中，GP73主要由胆管上皮细胞表达，在肝细胞中很少表达或几乎不表达。但是，在病毒性和非病毒性肝病中，GP73的表达剧烈上调。一项近期的研究在人类血清中检测到了GP73，并且在肝癌土拨鼠模型中发现GP73表达量在肝癌土拨鼠模型的血清和组织中均上调。Marreo等的研究表明GP73可用于肝癌早期诊断的参考，且其诊断敏感性高于AFP，此研究包括352个样本：与肝硬化患者相比，肝癌患者的血清GP73水平显著上升，若以10个相对单位为临界值，则GP73在肝癌诊断中的特异性为75%，敏感性为69%。此外，作为早期肝癌的诊断参考，GP73的效果优于AFP。因此，GP73是对肝癌诊断非常有价值的生物标志物，GP73联合AFP检测可提高肝癌的早期诊断率。

癌胚抗原相关细胞粘附因8(Carcinoembryonic antigen-related cell adhesion molecule8,CEA)是一种具有人类胚胎抗原特异性决定簇的富含多糖的酸性糖蛋白,1965年首次在正常胎儿消化道及结肠癌组织中被发现，属于非器官特异性肿瘤相关抗原。现有研究显示，CEA是一种广泛的人类肿瘤相关抗原。在结肠癌、胃癌、肺癌、卵巢癌、子宫癌等患者血清中，CEA浓度呈现不同程度的升高，这可能是因为分泌CEA的肿瘤多数位于空腔脏器（如胃肠道，呼吸道，泌尿道等）而正常情况下CEA直接经胃肠道得到代谢，只有在肿瘤状态时CEA通过血液和淋巴循环使得血清CEA浓度上升。CEA是目前最常用的肿瘤标志物之一，对于B超，CT等影像学方法难以诊断的恶性肿瘤，测定血清CEA浓度发挥了其潜在的优势。CEA的阈值因不同方法而略有不同，但其含量无明显性别差异，仅随年龄增大略有升高。据报道，联合使用AFP和CEA作为肿瘤标志物进行血清浓度检测有利于肝癌的早期诊断，也可用于原发性肝癌的鉴别。

然而，虽然血液中的一些因子能够随体液循环到达唾液腺，或随唾液分泌进入口腔或导致唾液中的基因转录谱发生改变，引起某些蛋白质的丰度或种类改变，从而反映出血液中部分蛋白质水平的变化。但目前研究发现，人唾液中有1939种蛋白质，人血浆中有3020种蛋白质，仅有27%的唾液蛋白质组与血浆蛋白质组重合。血浆蛋白质组学发现的177个与心血管疾病相关的潜在生物标志物的蛋白质中，也仅有40%的蛋白质出现在唾液蛋白质组中；在已列出的1058个潜在癌症相关生物标志物的蛋白质中，仅有34%的蛋白质出现在唾液蛋白质组中。

这表明许多血液循环中的生物标志物并非能够在唾液中得到鉴定。另外，即使是同一的蛋白，较之于血清，其在唾液中的含量通常明显较低。因此在实践中，两者没有必然的联系，往往需要研究人员经过大量的实验和分析，并做针对性的检测环节的调整改变，才能判断是否有蛋白质组重合的可能性。

综上所述，可以预期，若采用检测血清样本中生物标志物的方法，则取样不便、检测过程复杂、存在感染一些疾病的风险。

发明内容

本发明提供一种快速无损伤性检测肝肿瘤标志物的方法，并设计了针对唾液样本的免疫层析试纸条，从而真正实现无创，安全简便地检测肝肿瘤标志物。

本发明的试纸条的基本技术方案如下：