[发明专利]猫棒束孢粗多糖作为制备抗肿瘤药物的应用

说明书

技术领域

本发明涉及真菌提取物的抗肿瘤药物开发，具体为一种猫棒束孢粗多糖（以下简称IFP）作为制备抗肿瘤药物的应用。

背景技术

猫棒束孢（Isaria felina）是从天然冬虫夏草子实体中经菌种分离培养获得的一种菌株，在分类上属于半知菌纲、丛梗孢目、棒束孢属。经中国科学院微生物研究所鉴定为Isaria felina（DC.：Fr.）Fr.，该菌种已被中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心保藏（保藏号: CGMCC NO. 0706），并取得国家发明专利（ZL02103669.1）。Deffieux Gerard 等人（J Antibiot (Tokyo). 1981, 34(10): 1261-1265.）从Isaria felina中提取分离得到环羧酚酸肽结构的杀虫剂Isariins B、C和D，并对 Isariins B、C和D的结构进行了鉴定（J Antibiot (Tokyo). 1981, 34(10): 1266-1270.）。郭永霞从猫棒束孢菌丝体中分离纯化得到具有抗真菌作用的环缩肽isarfelin，并对isarfelin进行了理化性质的分析、结构鉴定，并发现isarfelin具有抑制细菌、抵抗真菌的活性（郭永霞关于猫棒束孢菌抗真菌多肽和巨大口蘑抗真菌蛋白的分离纯化及特性的研究：[博士论文]北京，中国农业大学，2005）。Ikumoto等研究发现冬虫夏草、蛹虫草及猫棒束孢的浸出液对离体心房有负收缩效应，同时对电刺激回肠的收缩反应及人血小板的凝结有抑制作用（Journal of the Pharmaceutical Society of Japan，1991，111(9)： 504-509）。专利ZL02103669.1公开了猫棒束孢的抗肿瘤活性功能，但是目前并没有任何研究从猫棒束孢中发现其抗肿瘤活性成分。 

发明内容

本发明为了解决目前未发现猫棒束孢中抗肿瘤活性成分的问题，提供了猫棒束孢中的抗肿瘤成分，即猫棒束孢粗多糖作为制备抗肿瘤药物的应用。

猫棒束孢粗多糖，其是由如下步骤制得的：取菌丝粉，加入3-5倍菌丝粉重量的蒸馏水，沸水浴提取70-110min，3000r/min转速下离心4-6min；于沉淀中继续加入3-5倍菌丝粉重量的蒸馏水，沸水浴提取20-40min，3000r/min转速下离心4-6min；于沉淀中继续加入3-5倍菌丝粉重量的蒸馏水，沸水浴提取20-40min，3000r/min离心4-6min；合并三次提取的上清液，水浴浓缩至800-1000mL，得混合液；加入3-4倍混合液体积的95%乙醇（优选为混合液体积的3.75倍）充分混匀，沉淀过夜；取沉淀，于70℃烘干得猫棒束孢粗多糖。上述制得的猫棒束孢粗多糖可应用于制备抗肿瘤药物中。

本发明采用SPF级昆明小鼠、SPF级裸鼠进行动物实验，对昆明小鼠分别接种小鼠H22肝癌细胞、小鼠S180肉瘤细胞、小鼠EAC腹水癌细胞后分别注入多种剂量的IFP、以及注入蒸馏水（阴性对照组）、注射用丝裂霉素、鸦胆子油口服乳液作为对照组，实验结果表明IFP与阴性对照组相比具有统计学差异，说明猫棒束孢粗多糖对H22移植瘤、S180移植瘤有很好的抑制效果并对腹水癌EAC小鼠有生命延长作用；对裸鼠分别接种人HepG2肝癌细胞、人Hela宫颈癌细胞后分别注入多种剂量的IFP、以及注入蒸馏水（阴性对照组）、注射用丝裂霉素、鸦胆子油口服乳液作为对照组，实验结果表明IFP与阴性对照组相比具有统计学差异，说明猫棒束孢粗多糖对HepG2移植瘤、Hela移植瘤有很好的抑制效果。综上所述，IFP有显著的抑制肿瘤的作用，可广泛适用于制备抗肿瘤药物中。

具体实施方式

实施例1：下面对猫棒束孢粗多糖的抗肝癌作用进行实验研究：

1. 材料和方法

1.1 动物

SPF（specific pathogen free）级昆明小鼠54只，体重20-22g，雄性，由山西省肿瘤研究所动物实验室繁殖，实验动物生产许可证号：SCXK（晋）2007-0001；实验动物使用许可证号：SYXK（晋）2007-0002。

SPF级BALB/c-nu裸鼠54只，体重16-18g，雄性，购自北京维通利华实验动物技术有限公司，动物生产许可证号：SCXK(京)2009-0017；实验动物饲养在清洁级屏障环境动物实验室，实验动物使用许可证号SYXK(晋)2007-0002。

药品与试剂