[发明专利]一种在小鼠胚胎细胞中基因定点突变的构建方法

权利要求书

1.一种在小鼠胚胎细胞中基因定点突变的构建方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)在小鼠目标基因组序列中确定目标靶序列；

(2)按所述目标靶序列的顺序，构建能够识别并切割目标基因的TALEN核酸序列；

(3)将所述TALEN核酸序列导入小鼠胚胎细胞内；

所获得的小鼠胚胎细胞用于体外培养或直接植入母鼠，表达TALEN并切割目标基因组，从而筛选目标基因突变的小鼠。

2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述小鼠目标基因组序列包括编码基因的基因组序列、低度重复序列、中度重复序列、高度重复序列、低拷贝序列、基因间的转录活跃序列或非转录序列。

3.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述小鼠胚胎细胞包括小鼠单细胞受精卵或多细胞小鼠胚胎。

4.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤(3)是将所述TALEN核酸序列在体外转录为mRNA并纯化后，通过显微注射导入小鼠胚胎细胞。

5.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤(3)中，切割目标基因组所形成的DNA断裂位点通过非同源末端连接修复或通过同源重组修复。

6.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述目标基因突变包括碱基插入、缺失、改变、移码突变或敲除。

7.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述目标基因突变的小鼠是指通过选取目标基因发生突变的小鼠与野生型小鼠杂交，再选取上述杂交所得的同窝杂合子小鼠进行自交，然后从上述所得新生小鼠中筛选目标基因突变的纯合子小鼠。

8.一种小鼠胚胎细胞，其特征在于，所述细胞是按权利要求1-7所述的方法制备获得。

9.一种纯合子小鼠，其特征在于，所述纯合子小鼠含有按权利要求1-7所述方法制备获得的小鼠胚胎细胞。