[发明专利]检测莫能菌素的磁颗粒化学发光试剂盒及其应用

说明书

技术领域

本发明涉及一种直接化学发光检测试剂盒及其检测方法。特别是检测动物组织、饲料等样本中莫能菌素药物残留的磁颗粒竞争直接化学发光检测试剂盒。 

背景技术

莫能菌素（Monensin）是聚醚类抗生素，被广泛用于动物疾病的治疗，其主要作用机理是干扰球虫细胞内钠钾离子的正常交换，是大量的钠离子进入细胞内，造成钠离子在胞内浓度高，渗透压上升，跟多的水分进图球虫内，为了排除细胞内多余的钠，球虫必须动用能量将多余的钠外泵排除，最终造成有限的能量被用完；而后钠钾离子交换中断停止，细胞膨胀、变形、破裂、崩解。莫能菌素还可以影响反刍动物瘤胃内能量代谢，改善瘤胃发酵，提高丙酸与乙酸的产出比例，降低挥发性脂肪酸，减少甲烷生成，提高蛋白质利用效率。因此能够显著提高反刍动物的饲料利用率和促进生长的作用。但是莫能菌素在动物食品中的残留会影响人类健康，因此，欧美国家及我国均规定了莫能菌素在动物组织中的最大残留量。 

目前，莫能菌素药物的残留检测主要采用高效液相色谱法、气相色谱-质谱法和酶联免疫吸附法等方法。 

1、高效液相色谱法（HPLC）具有检测精度高、假阳性率低的特点。HPLC法的主要缺点是仪器价格昂贵，操作比较繁琐，耗时长，检测费用昂贵，对检测人员专业要求较高，样本前处理较复杂。 

2、气相色谱-质谱法（GC-MS）灵敏度很高，假阳性率低。该方法的主要缺点是样品需要衍生化这样复杂的前期处理。虽然经过衍生化处理的样品能在质谱中给出更多的结构信息，但是衍生化会产生多个不同的产物并导致样品的部分丢失，造成实验结果的偏差。 

3、酶联免疫法（ELISA）是20世纪70年代出现，用于微量物质的检测， 最早应用于传染病、肿瘤标志物、激素水平等临床检测，90年代开始在我国食品安全检测领域推广应用，目前依托ELISA技术的试剂盒、试纸条已经成为食品安全快速检测领域的主导产品，同时也是我公司研发和销售的主要产品类型。酶联免疫检测法基于抗原-抗体的特异性反应，检测灵敏度较高、特异性较好，技术操作简易，容易掌握，确实解决了大量的以前难以解决的许多微量小分子物质如抗生素、激素、农药残留等的定性、定量分析工作，对食品安全快速检测技术的发展起到了积极的促进作用。但是，ELISA方法存在许多自身无法克服的缺陷，主要表现在： 

1）非均相反应：检测过程中为分离游离物与结合物，需要多步洗板过程，耗时费力，难以提高操作的自动化程度。 

2）酶催化反应：借助酶催化底物显色，测定反应液吸光度值。反应的时间与温度对酶活力存在较大影响，试剂稳定性差。 

发明内容

本发明所要解决的技术问题在于提供一种检测莫能菌素的化学发光试剂盒，采用该试剂盒进行莫能菌素的检测时不仅具备较高的灵敏度，特异性，而且具有较高的反应速度。 

本发明的另一个目的在于提供一种莫能菌素的测试方法，该方法操作简单，灵敏度高，特异性好。 

 实现上述目的，本发明提供一种莫能菌素检测试剂盒，其包含的主要试剂有：发光标记物、荧光素标记物、标准品、质控品、分离试剂。 

所述的分离试剂是包被有羊抗FITC抗体的顺磁性纳米微珠。 

所述的顺磁性纳米微珠，表面含有-OH、-COOH或-NH₂活性基团的微珠，用于包被羊抗FITC单克隆抗体，其内芯是Fe₃O₄或γ-Fe₂O₃，使得微珠具有顺磁性。 

所述的发光标记物是异鲁米诺衍生物标记的莫能菌素半抗原。所述的异鲁米诺衍生物是ABEI、AHEI或ABEN。 

所述的试剂盒还包括标准品，质控品和浓缩洗液。 

所述的荧光素标记物是FITC标记莫能菌素单克隆抗体。 

本发明还提供一种利用试剂盒检测莫能菌素的方法，包括下列步骤： 

1）分别吸取20μl-100μl标准品或样本，然后加入20μl-100μl发光标记物，再加20μl-100μl荧光素标记物，充分混匀后，37℃温育15min； 

2）加入包被有羊抗FITC单克隆抗体的顺磁性纳米微珠80-150μl，混匀后在37℃温育5min；  

3）用磁分离架分离5min，弃上清后用清洗液300-500μl冲洗复合物沉淀； 

4）上述清洗步骤重复2-4次；