[发明专利]DNA甲基化的检测探针、检测方法及检测试剂盒无效
| 申请号： | 201210288700.6 | 申请日： | 2012-08-14 |
| 公开（公告）号： | CN103589777A | 公开（公告）日： | 2014-02-19 |
| 发明（设计）人： | 张春阳;曹岸萍 | 申请（专利权）人： | 中国科学院深圳先进技术研究院 |
| 主分类号： | C12Q1/68 | 分类号： | C12Q1/68;C12N15/11 |
| 代理公司： | 广州华进联合专利商标代理有限公司 44224 | 代理人： | 吴平 |
| 地址： | 518055 广东省深圳*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | dna 甲基化 检测 探针 方法 试剂盒 | ||
1.一种DNA甲基化检测探针，其特征在于，包括5’端和3’端的用于与甲基化DNA互补配对的序列以及中间部分的用于引发超分支滚环扩增反应的特异性序列，其中，检测探针3’端的最后一个碱基为鸟嘌呤，所述鸟嘌呤与甲基化DNA中部的甲基化胞嘧啶配对，且检测探针3’端的序列与甲基化DNA的自中部所述甲基化胞嘧啶至3’端的序列反向互补配对，检测探针5’端的序列与甲基化DNA的自中部所述甲基化胞嘧啶的临近脱氧核苷酸至5’端的序列反向互补配对。
2.根据权利要求1所述的DNA甲基化检测探针，其特征在于，所述检测探针的DNA序列是SEQ ID NO:1。
3.一种DNA序列为SEQ ID NO：1的检测探针在检测人类非小细胞肺癌细胞系基因组甲基化程度中的应用。
4.一种DNA甲基化的检测方法，其特征在于，包括如下步骤：
用亚硫酸氢盐处理待测DNA，使所述待测DNA中未甲基化的胞嘧啶转化成尿嘧啶；
向亚硫酸氢盐处理后的待测DNA中加入如权利要求1所述的检测探针进行DNA融合反应；
向融合反应得到的产物中加入DNA连接酶，进行连接反应；
使用超分支滚环扩增方法扩增上步骤得到的产物并进行光谱信号检测。
5.根据权利要求4所述的DNA甲基化检测方法，其特征在于，所述亚硫酸氢盐为亚硫酸氢钠或亚硫酸氢钾。
6.根据权利要求4所述的DNA甲基化的检测方法，其特征在于，还包括在融合反应后向融合反应后得到的产物中加入DNA消化液，消化未完全互补配对的DNA序列的步骤。
7.根据权利要求4所述的DNA甲基化检测方法，其特征在于，所述进行光谱信号检测是将超分支滚环扩增后的DNA产物与SYBR Green I荧光染料混合，在荧光光度计下检测混合物的发射波强度。
8.一种人类非小细胞肺癌检测试剂盒，其特征在于，包括检测探针，所述检测探针的DNA序列是SEQ ID NO:1。
9.根据权利要求8所述的人类非小细胞肺癌检测试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括超分支滚环扩增引物，所述超分支滚环扩增的正向引物的DNA序列和反向引物的DNA序列分别为SEQ ID NO:3和SEQ ID NO:4。
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