[发明专利]一种黄精的组织培养方法

说明书

技术领域

本发明涉及植物组织培养方法，具体地说是黄精的组织培养方法。

背景技术

黄精(Polygonaturm sibiricum Redoute)别名鸡头黄精、鸡头参，属于百合科（Liliaceae）黄精属（Polygonatum）多年生草本植物。中药以黄精根茎入药，具有补脾润肺、益气养阴、强壮筋骨等功效，能治疗体虚乏力、心悸气短、肺燥干咳、病后体虚、风湿痛疼、糖尿病等疾病，其活性成分主要为黄精多糖及皂甙等。

地藏黄精是安徽九华山地区特有的野生黄精品种，有着极高的药用和经济价值，随着黄精药用价值和保健价值越来越被人们认识,黄精原料的需求量也越来越大,致使野生黄精的无计划采集加剧,导致其资源枯竭加速,影响可持续开发利用。因此,为了保证黄精原料来源、实行产业化种植将成为必然趋势。近年来虽然有些地方开始人工种植黄精,但由于生产上多采用分根繁殖,其繁殖系数低,质量不稳定,故黄精种苗问题成了人工大面积种植的瓶颈。

植物的离体快速繁殖，是目前植物组织培养中应用最广泛、最有效的技术，尤其对于新引进品种、脱毒苗、优良单株、濒危植物和基因工程植株等可实现离体快速增殖，且不受地区、气候影响，繁殖速度比常规生产快数百万倍，能迅速提供大量优质种苗。目前，人们对黄精的研究主要集中在其成分测定、药理作用以及人工栽培等方面，而关于组织培养方面的研究内容较少。

发明内容

本发明的目的在于提供一种黄精的组织培养方法，通过该方法可以对黄精进行快速繁殖，并实现大面积工业化种植，以解决野生地藏黄精产量低、供应少和自然栽培周期长的问题。

本发明解决技术问题采用如下方案：

（1）外植体的选择与灭菌

选择当年生地下茎上的幼芽或当年生带有隐藏芽点的的块茎部分，所述块茎将其切成小块，且每块都带有至少一个隐藏的芽点；

将所述幼芽或块茎用自来水快速冲去泥沙，并用洗涤剂液浸泡30min以除去表面污垢，然后自来水冲洗3h，再置于超净工作台用体积浓度75%酒精灭菌15s，无菌水冲洗3遍，再将其放入体积浓度0.2%Hgcl₂溶液中浸泡12-14min，所述Hgcl₂溶液中包含有体积浓度0.15%-02%的吐温20，之后无菌水冲洗5遍，转入培养皿中吸干水分，等待接入培养基；

（2）幼芽丛生芽的诱导、块茎丛生芽愈伤组织培养和增殖培养

A、将经过步骤（1）处理的幼芽转入丛生芽诱导培养基中，所述丛生芽诱导培养基的配方为：MS+6-BA 4.0mg/L+NAA0.2mg/L+琼脂7g/L+蔗糖30g/L，pH=5.8；培养条件为温度：23±1℃、光照1500-2000Lx；光照时间为10-12小时/天，培养时间为20-30天；然后直接转入生根培养；

B、①将经过步骤（1）处理的带有隐藏芽点的的块茎接种MS+6-BA 4.0mg/L+NAA 0.2mg/L+琼脂7g/L+蔗糖30g/L，pH=5.8培养基上，23±1℃、光照1500-2000Lx；光照时间为10-12小时/天，培养时间为20-30天；中间剔除污染的块茎外植体；②在块茎组织分化形成愈伤组织后，转入培养基为：MS+6-BA 3.0mg/L+NAA 0.2mg/L+琼脂7g/L+蔗糖30g/L，pH 5.8；培养条件为温度23±1℃、光照1500-2000Lx；光照时间为10-12小时/天，培养时间为10-20天；愈伤组织进行增殖，将增殖后的愈伤组织切成1.0cm*1.0cm*1.0cm大小然后转入原先的诱导培养基MS+6-BA 4.0mg/L+NAA 0.2mg/L+琼脂7g/L+蔗糖30g/L，pH=5.8培养基上，23±1℃、光照1500-2000Lx；光照时间为10-12小时/天，培养时间为15-25天；

（3）生根的培养

将经过步骤（2）处理的外植体转入生根培养基中培养，所述生根培养基的配方为：1/2-1/3MS、NAA 0.2-0.5mg/L、琼脂6-8g/L、蔗糖20-30g/L；培养条件为温度23±1℃、光照1500-2000Lx；光照时间为10-12小时/天，培养时间为35-50天；

（4）炼苗和移栽