[发明专利]TNFR-Ig融合蛋白的生产

权利要求书

1.在大规模生产细胞培养物中生产TNFR-Ig的方法，包括步骤：

提供细胞培养物，其包括；

含有TNFR-Ig编码基因且该基因可在细胞培养条件下表达的哺乳动物细胞；以及

含有谷氨酰胺的培养基，其具有选自以下的培养基特征及其组合：(i)每单位体积中累积氨基酸量大于约70mM，(ii)累积谷氨酰胺与累积天冬酰胺的摩尔比率小于约2，(iii)累积谷氨酰胺与累积总氨基酸的摩尔比率小于约0.2，(iv)累积无机离子与累积总氨基酸的摩尔比率为约0.4至1，(v)每单位体积谷氨酰胺与天冬酰胺的组合累积量大于约16mM；

将所述培养物在起始生长阶段的第一组培养条件下维持足够长的第一段时间，以使所述细胞增殖至活细胞密度达到所述培养物在此第一组培养条件下可达到的最大可能活细胞密度的20%-80%范围；

改变至少一个培养条件，从而应用第二组培养条件；

将所述培养物在第二组培养条件下维持第二段时间，使TNFR-Ig在细胞培养物中累积。

2.在大规模生产细胞培养物中生产TNFR-Ig的方法，包括步骤：

提供细胞培养物，其包括；

含有TNFR-Ig编码基因且该基因可在细胞培养条件下表达的哺乳动物细胞；以及

每单位体积中累积氨基酸量大于约70mM的培养基；且

所述培养基含有谷氨酰胺；且

所述培养基具有选自以下的两项培养基特征及其组合：(i)累积谷氨酰胺与累积天冬酰胺的摩尔比率小于约2，(ii)累积谷氨酰胺与累积总氨基酸的摩尔比率小于约0.2，(iii)累积无机离子与累积总氨基酸的摩尔比率为约0.4至1，(iv)每单位体积谷氨酰胺与天冬酰胺的组合累积量大于约16mM；

将所述培养物在起始生长阶段的第一组培养条件下维持足够长的第一段时间，以使所述细胞增殖至活细胞密度达到所述培养物在此第一组培养条件下可达到的最大可能活细胞密度的20%-80%范围；

改变至少一个培养条件，从而应用第二组培养条件；

将所述培养物在第二组培养条件下维持第二段时间，使TNFR-Ig在细胞培养物中累积。

3.在大规模生产细胞培养物中生产TNFR-Ig的方法，包括步骤：

提供细胞培养物，其包括；

含有TNFR-Ig编码基因且该基因可在细胞培养条件下表达的哺乳动物细胞；以及

累积谷氨酰胺与累积天冬酰胺的摩尔比率小于约2的培养基；且

所述培养基含有谷氨酰胺；且

所述培养基具有选自以下的两项培养基特征及其组合：(i)每单位体积培养基中含有累积氨基酸量大于约70mM，(ii)累积谷氨酰胺与累积总氨基酸的摩尔比率小于约0.2，(iii)累积无机离子与累积总氨基酸的摩尔比率为约0.4至1，(iv)每单位体积谷氨酰胺与天冬酰胺的组合累积量大于约16mM；

将所述培养物在起始生长阶段的第一组培养条件下维持足够长的第一段时间，以使所述细胞增殖至活细胞密度达到所述培养物在此第一组培养条件下可达到的最大可能活细胞密度的20%-80%范围；

改变至少一个培养条件，从而应用第二组培养条件；

将所述培养物在第二组培养条件下维持第二段时间，使TNFR-Ig在细胞培养物中累积。

4.在大规模生产细胞培养物中生产TNFR-Ig的方法，包括步骤：

提供细胞培养物，其包括；

含有TNFR-Ig编码基因且该基因可在细胞培养条件下表达的哺乳动物细胞；以及

累积谷氨酰胺与累积总氨基酸的摩尔比率小于约0.2的培养基；且

所述培养基含有谷氨酰胺；且

所述培养基具有选自以下的两项培养基特征及其组合：(i)每单位体积培养基中含有累积氨基酸量大于约70mM，(ii)累积谷氨酰胺与累积天冬酰胺的摩尔比率小于约2，(iii)累积无机离子与累积总氨基酸的摩尔比率为约0.4至1，(iv)每单位体积谷氨酰胺与天冬酰胺的组合累积量大于约16mM；

将所述培养物在起始生长阶段的第一组培养条件下维持足够长的第一段时间，以使所述细胞增殖至活细胞密度达到所述培养物在此第一组培养条件下可达到的最大可能活细胞密度的20%-80%范围；

改变至少一个培养条件，从而应用第二组培养条件；

将所述培养物在第二组培养条件下维持第二段时间，使TNFR-Ig在细胞培养物中累积。