[发明专利]一种测定生鲜冷却牛肉中生物胺的方法

权利要求书

1.一种生鲜冷却牛肉中生物胺的测定方法，其特征在于，步骤包括：

I.前处理

（1）提取：取牛肉样品与三氯乙酸水溶液混合匀浆后提取2～3次，离心取上清液，合并得到上清液III；用正己烷萃取，取下层液体即为样品提取液；

（2）净化：步骤（1）的样品提取液过混合型阳离子交换固相萃取柱，洗脱后取洗脱液干燥，溶解于乙腈甲醇溶液，并过滤；具体步骤为，混合型阳离子交换固相萃取柱活化后，取步骤（1）的样品提取液上柱，用水和醇依次洗涤后用氨水甲醇溶液洗脱；洗脱液吹干后加入乙腈甲醇溶液混合均匀，过滤；氨水甲醇溶液中，氨的体积浓度为4%～6%；

II.HPLC-MS/MS测定

（A）色谱条件为：亲水作用色谱柱；流速：0.15～0.3mL/min；进样量：8～12μL；分析时间：12～15min；柱温：34～36℃；A相为水相，水相为乙酸铵和甲酸的水溶液，其中乙酸铵含量1.5～2.5mmol/L,甲酸含量0.05wt%～0.15wt%，B相为乙腈；

梯度洗脱条件：水相的体积百分比变化为：0～5min，30%匀速变为60%；5～8min为洗脱，60%；8～8.1min，由60%变为30%；8.1～15min为平衡，水相30%；

（B）质谱条件：离子源温度116～122℃，脱溶剂温度295～310℃；脱溶剂气和锥孔气N₂，脱溶剂气流速450～520L/h，锥孔气流速48～53L/h，碰撞气体为氩气；毛细管电压为2.80～3.20kV；扫描方式为正离子扫描，驻留时间45～60ms。

2.权利要求1所述生鲜冷却牛肉中生物胺的测定方法，其特征在于，步骤（1）中，每次提取时，三氯乙酸水溶液与牛肉样品用量比为3～5ml/g，上清液III与正己烷体积比为1：0.8～1.2，所述的三氯乙酸水溶液浓度为4wt%～6wt%。

3.权利要求1所述生鲜冷却牛肉中生物胺的测定方法，其特征在于，步骤（1）中，每次提取时，三氯乙酸水溶液与牛肉样品用量比为4ml/g，上清液III与正己烷体积比为1：1，所述的三氯乙酸水溶液浓度为5wt%。

4.权利要求1所述生鲜冷却牛肉中生物胺的测定方法，其特征在于，步骤（2）中，所述氨水甲醇溶液中，氨的体积浓度为5%。

5.权利要求1所述生鲜冷却牛肉中生物胺的测定方法，其特征在于，所述色谱条件为，流速0.2mL/min；进样量10μL；分析时间15min；柱温35℃；水相中乙酸铵含量2mmol/L，甲酸含量0.1wt％。

6.权利要求1所述生鲜冷却牛肉中生物胺的测定方法，其特征在于，所述的质谱条件为：采用电喷雾离子源，离子源温度120℃；脱溶剂温度300℃；；脱溶剂气流速500L/h，锥孔气流速50L/h；；毛细管电压为3.00kV；扫描方式为正离子扫描，驻留时间50ms；监测模式为多反应监测模式。

7.权利要求1所述生鲜冷却牛肉中生物胺的测定方法，其特征在于，所述生物胺为酪胺、组胺、腐胺、尸胺、色胺和苯乙胺。