[发明专利]固相法和液相法结合合成八肽胆囊收缩素的方法

说明书

技术领域

本发明涉及八肽胆囊收缩素（辛卡利特包括醋酸盐、三氟乙酸盐）的制备方法，尤其涉及固相法和液相法相结合合成八肽胆囊收缩素的方法。

背景技术

八肽胆囊收缩素，也称：辛卡利特，英文名：Sincalide

结构式：H-ASP-TYR(SO3H)-MET-GLY-TRP-MET-ASP-PHE-NH2

分子式及分子量：C49H62N10O16S3； 1143.27

性质：又称缩胆促胰素，肠促胰酶素，胆囊收缩素，胰酶分泌素。猪上部十二指肠黏膜提取而得的单链多肽激素。由33个氨基酸组成。一种消化道激素，刺激胰腺外分泌腺分泌和生长，也在饱感，痛觉及神经传导等方面具有作用。由十二指肠、空肠、回肠的M[I]细胞分泌。

辛卡利特是一种八肽胆囊收缩素（CCK），具有整个胆囊收缩素的全部生物活性，且活性要比一般的强2-10倍。胰腺功能不足的病人和胃素瘤患者血浆CCK浓度增高，此外，CCK还参与中枢神经系统的发病。近年来合成的辛卡利特被广泛应用于诊断胆囊和胰腺的功能。辛卡利特的制备方法分为酶法和化学法两种。

1.酶解法

酶解法合成是嗜热菌蛋白酶，以木瓜蛋白酶和ａ-胰凝乳蛋白酶等酶系多酶联用，采用片段缩合的方法合成辛卡利特，其中一些氨基酸原料的制备以多肽保护剂的脱除任然需要化学法辅助才能完成。此类方法主要参见以下文献：美国国家科学院进展 Kullmann W. Protease-catalyzed peptide synthesis of the carboxy-terminal octapeptide of Cholecystokinin. Proc Natl Acad Sci USA, 1982,79:2840; 世界药物化学专利Chem.Pharm.Bull.1988,36:3915; 捷克斯洛伐克化学期刊Collection Czechoslvak Chem. Commum.1988,53:1086等。酶解法存在的主要问题是：单纯的酶解法不能完成辛卡利特的合成，需要联用化学方法才可以合成出目的产物;酶解法涉及酶制剂种类比较多（如木瓜蛋白酶，嗜热菌蛋白酶和ａ-胰凝乳蛋白酶），且酶制剂价格昂贵，不易得；酶解法生产属于液相合成范畴，中间产物分离困难，而且制备周期长。因而目前辛卡利特的生产已经不在使用酶解法，取而代之的是用化学合成的方法。

2.  化学合成法

化学合成法可以用固相合成多肽序列在上磺酸化，可采用液相缩合片段，然后上磺酸化的方式，或者合成磺酸化多肽序列后切割脱除肽链保护基团的方法。此类方法主要参见以下文献：药物化学杂志（Journal of Medicinal Chemistry）,1970,13(3):349-352; Pept.: Struct. Funct., Proc. Am. Pept. Symp., 9th. 1985, 241-244; 多肽蛋白研究国际杂志（International Journal of Peptide ＆ Protein Research）, 1991, 38(6): 555-561; 生物化学杂志， 1991， 7（4）：436-440； 中国药物化学杂志。 1993，(1):39-41; 多肽蛋白研究国际杂志（International Journal of Peptide ＆ Protein Research），1994,43(2):190-200。当前化学法中存在的主要问题是：合成后再磺酸化的方法属于液相合成范畴，操作步骤多，中间产物分离麻烦，制备周期长，且反应中容易产生副产物导致辛卡利特产率大大下降；一般的固相合成，原料选择特殊，成本价格高，还有正常的TFA切割氨基树脂，对多肽链上的磺酸脂键不稳定，容易断裂，导致部分分解，产率和纯度也有一定的下降。

发明内容

本发明的目的是提供一种固相法和液相法结合合成八肽胆囊收缩素的方法，主要解决现有合成方法存在中间产物分离麻烦、制备周期长且反应中容易产生副产物、成本高、产率较低等技术问题。

本发明技术方案如下：固相法和液相法结合合成八肽胆囊收缩素的方法，其具体包含以下步骤：