[发明专利]人中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白的B细胞表位肽段及其应用

说明书

本发明属于医学领域，特别涉及急性肾损伤的诊断技术，所述人NGAL的B细胞表位肽段及其制备的杂交瘤细胞；B细胞表位肽段、其特异性抗体及特异性抗体的免疫复合物在制备急性肾损伤的诊断试剂中的应用；本发明制备的B细胞表位肽段免疫小鼠制备的单克隆抗体具有纯度高(SDS‑PAGE检测纯度＞96％)、效价高(ELISA效价达1∶256000)、特异性好、可大批量制备等优点；通过本发明制备的单克隆抗体、多克隆抗体可用于病人尿液NGAL含量的检测，如可采用“双抗体夹心”ELISA反应模式，即酶标记人抗NGAL单抗、酶标板包被抗NGAL多抗和被测样品NGAL抗原形成“双抗体夹心”结构进行测定。

技术领域

本发明属于医学领域，特别涉及急性肾损伤的诊断技术。

背景技术

急性肾损伤(acute kidney injury，AKI)，有时混淆于急性肾功能衰竭(acuterenal failure，ARF)，尚无统一的定义。目前普遍接受的AKI概念是指各种原发或继发损伤因素导致的肾脏结构的改变、肾功能下降以及最终肾衰竭的整个过程。有研究表明，冠状动脉旁路移植术后病人AKI发病率达到26.6％，严重创伤后AKI发病率达到50％，而AKI在重症监护病房(ICU)中病死率高达37％～76.19％，是一种发病率和病死率很高的临床综合症。早期治疗对AKI的逆转十分重要，而早期诊断是早期治疗的前提和关键所在。

目前AKI的诊断和分级标准，主要是AKIN(Acute Kidney Injury Network)国际组织于2007年提出的AKIN标准，该标准将AK1分为三级：一级为血肌酐(sCr)升高到基础值的150～200％；二级为sCr升高到基础值的200～300％；三级为sCr升高到基础值的300％以上。这种主要以sCr水平为基础的标准，对AKI的早期诊断缺乏敏感性和特异性。如当肾功能下降50％时，sCr水平才开始上升，因此将sCr作为AKI诊断指标几乎起不到肾功能保护的作用，这也是长期以来AKI临床治疗效果不佳的主要原因。为更好地进行AKI的预防、诊断、治疗以及预后评估，发现和鉴定AKI新的敏感生物标志物并建立准确的测定方法是AKI防治研究的重要方向。

中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白(NGAL)是Kjeldsen L等人1993年在中性粒细胞特异性颗粒中发现的一种小分子分泌型蛋白。后续的研究发现NGAL也在人体多种组织如肾、前列腺、呼吸道和消化道上皮中低水平表达，而在炎症时的中性粒细胞、乳腺癌及膀胱上皮癌细胞中表达显著增高。更为重要的发现是Mishra J等2003年研究观察到在缺血再灌注损伤后的小鼠肾脏和顺铂诱导的中毒性肾损害中，小鼠尿液中NGAL在损伤后3h测定值升高大于三倍，在12h可达正常的12倍，72h恢复到正常水平，能很好地反应AKI的病程和损伤程度；2005年Lancet杂志上报道了71例接受心脏手术的患儿的研究发现，体外循环(cardiopulmonary bypass，CPB)后2h的血和尿NGAL是预测AKI的可靠指标，其曲线下面积(under the curve，AUC)分别为0.910和0.998。2008年Nickola等另一项研究监测了635例急诊科患者的尿NGAL水平，结果发现，尿NGAL在诊断AKI具有较高的敏感性和特异性(分别为90％和99％)，引起了人们对NGAL检测的广泛关注。