[发明专利]一种视网膜祖细胞培养方法及其培养基有效
| 申请号： | 201210268933.X | 申请日： | 2012-07-30 |
| 公开（公告）号： | CN102747029A | 公开（公告）日： | 2012-10-24 |
| 发明（设计）人： | 王卓实;张明琦;徐玲 | 申请（专利权）人： | 何伟 |
| 主分类号： | C12N5/071 | 分类号： | C12N5/071;C12N5/0797 |
| 代理公司： | 北京集佳知识产权代理有限公司 11227 | 代理人： | 冯琼 |
| 地址： | 110034 辽宁*** | 国省代码： | 辽宁;21 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 视网膜 细胞培养 方法 及其 培养基 | ||
1.一种细胞培养方法，包含以下步骤：
步骤1：取海藻酸钠粉末与溶剂混合，混合均匀加热制成海藻酸钠凝胶，灭菌备用；
步骤2：收集成球培养的细胞，离心取沉淀，用培养基混匀细胞，种植在铺有海藻酸钠凝胶的细胞培养装置中进行培养；
所述培养基配方为DMEM/F12培养液，添加终浓度为1:100的N-2添加物，终浓度为10-20ng/ml的表皮生长因子EGF，终浓度为10-20ng/ml碱性生长因子bFGF，终浓度为10-20ng/ml的三碘甲状腺氨酸T3、终浓度为10-20ng/ml的神经营养素NT4、终浓度为10-20ng/ml神经生长因子NGF、终浓度为10-20ng/ml神经营养物质NF3以及终浓度2mmol/l L-谷氨酰胺制成。
2.根据权利要求1所述的细胞培养方法，其特征在于，所述细胞为视网膜祖细胞或神经干细胞。
3.根据权利要求1所述的细胞培养方法，其特征在于，所述培养基配方为DMEM/F12基础培养基，添加终浓度为1:100的N-2添加物，终浓度为10ng/ml的表皮生长因子EGF，终浓度为10ng/ml碱性生长因子bFGF，终浓度为20ng/ml的三碘甲状腺氨酸T3、终浓度为20ng/ml的神经营养素NT4、终浓度为20ng/ml神经生长因子NGF、终浓度为20ng/ml神经营养物质NF3以及终浓度2mmol/l L-谷氨酰胺制成。
4.根据权利要求1所述的细胞培养方法，其特征在于，所述溶剂为水或平衡盐溶液。
5.根据权利要求1或4所述的细胞培养方法，其特征在于，海藻酸钠粉末与溶剂比例为2:100-5:100。
6.根据权利要求1所述的细胞培养方法，其特征在于，所述加热为加热至55℃。
7.一种细胞培养基，其特征在于，所述培养基配方为：DMEM/F12培养液，添加终浓度为1∶100的N-2添加物，终浓度为10-20ng/ml的表皮生长因子EGF，终浓度为10-20ng/ml碱性生长因子bFGF，终浓度为10-20ng/ml的三碘甲状腺氨酸T3、终浓度为10-20ng/ml的神经营养素NT4、终浓度为10-20ng/ml神经生长因子NGF、终浓度为10-20ng/ml神经营养物质-3NF3以及终浓度2mmol/l L-谷氨酰胺制成。
8.根据权利要求7所述的培养基，所述培养基配方为DMEM/F12基础培养基，添加终浓度为1∶100的N-2添加物，终浓度为10ng/ml的表皮生长因子EGF，终浓度为10ng/ml碱性生长因子bFGF，终浓度为20ng/ml的三碘甲状腺氨酸T3、终浓度为20ng/ml的神经营养素NT4、终浓度为20ng/ml神经生长因子NGF、终浓度为20ng/ml神经营养物质NF3以及终浓度2mmol/l L-谷氨酰胺制成。
9.权利要求7或8所述培养基在培养视网膜祖细胞或神经干细胞中的用途。
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