[发明专利]簇毛麦6VL染色体上抗秆锈病基因连锁标记、引物对及用法

权利要求书

1.一种簇毛麦6VL染色体上抗秆锈病基因连锁标记的引物对，其特征在于，所述引物对中的一条引物的脱氧核糖核苷酸序列如序列表中序列SEQ ID NO.1所示，所述引物对中的另一条引物的脱氧核糖核苷酸序列如序列表中序列SEQ ID NO.2所示。

2.一种簇毛麦6VL染色体上抗秆锈病基因连锁标记，其特征在于，是采用引物对SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2自簇毛麦DNA中扩增出来的一段358bp的核苷酸序列，所述358bp DNA片段的脱氧核糖核苷酸序列如序列表中序列SEQ ID NO.3所示。

3.根据权利要求2所述一种簇毛麦6VL染色体上抗秆锈病基因连锁标记，其特征在于，所述引物对扩增出的标记为共显性标记，既可扩增出簇毛麦6VL染色体特异的的358bp条带，也可扩增出普通小麦6AL染色体特异的230bp条带，用于区分抗病单株为纯合还是杂合。

4.一种簇毛麦6VL染色体上抗秆锈病基因连锁标记引物对的用法，其特征在于，采用权力要求1至3任一项所述的引物对对以小麦-簇毛麦T6AS.6VL抗秆锈病易位系为亲本的分离群体进行PCR扩增及其产物检测，若所述扩增产物出现6VL特异的358bp条带而不出现6AL特异的230bp条带，则所述待测植物为含有1对T6AS.6VL易位染色体的抗秆锈病纯合体；若所述扩增产物同时出现358bp和230bp条带，则所述待测植物为含有单个T6AS.6VL易位染色体的抗秆锈病杂合体；若所述PCR扩增产物中仅扩增出230bp条带，则所述待测植物不含T6AS.6VL易位染色体，相应丧失对秆锈病的抗性。

5.根据权利要求4所述的簇毛麦6VL染色体上抗秆锈病基因连锁标记的用法，其特征在于：

所述PCR扩增的反应体系：10uL反应体系中含约10～20ng模板DNA，1×PCR buffer，1.5mmol L^-1MgCl₂，200mmol L^-1dNTP，左右引物终浓度各为0.2umol L^-1，0.5U Taq DNA聚合酶；

所述PCR扩增的反应程序：94℃预变性3分钟；94℃变性30秒，60℃退火30秒，72℃延伸45秒，32个循环；72℃延伸10分钟；

所述PCR扩增的产物检测：PCR扩增产物经8％非变性聚丙烯酰胺凝胶上电泳分离，用银染法染色。